• Forum - Froid, Extraction, ARN

[Biochimie] L'acétone à froid dans l'extraction de l'ARN

après avoir cherché à plusieurs reprises sur internet, je n'ai pas réussi à trouver le rôle de l'acétone à froid dans l'extraction de l'ARN.  [...] On me l'avait expliqué comme étant une étape de purification, toutes les molécules qui pouvaient se fixer sur l'acide nucléique ne pouvait le faire dans l'acétone. Sur le moment, j'avais pris ça pour argent comptant, mais maintenant, c'est vrai que c'est intéressant comme réflexion.   [...]

[Biochimie] ARNm et résistance à la température

Est-ce que les ARNm résistent aux températures élevés de l'ordre de 90°-100°C En fait je teste un protocole de lyse cellulaire par congélation/décongélation pour extraire les ARN ensuite.  [...] Sinon les ARNm son plutôt travaillés dans la glace, les RNases étant des protéines se retrouvant partout et très difficile à inhiber complètement. L'important dans ce genre de manip, c'est le froid et la rapidité. On m'a toujours dit que la demi vie des ARN bactérien était de quelques minutes à t° ambiante et vu la complexité de l'extraction, j'ai jamais cherché à affirmer ou infirmer celà.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction des ARN par la méthode phénol/chloroforme

j'aurais une petite question au sujet de l'extraction des ARN totaux par la méthode au phénol chloroforme.  [...] J'ai fait pas mal d'extraction d'ARN par cette méthode et je n'utilisais pas ces sels.  [...]

[Biochimie] Améliorer la quantité, qualité et pureté d'une extraction d'ARN

D'autre part, j'ai mesuré la qualité de l'extraction en mesurant le ration 28S/18S pour chaque méthode utilisé. Pour l'échantillon de précipitation le ratio est 1,39. Pour l'échantillon colonne le ratio est de 1,28. Je remarque qu'il y aune plus grande dégradation dans les échantillons où la méthode par colonne a été fait contrairement aux échantillons fait par la méthode par précipitation.  [...] Pour la méthode de précipitation on a centrifugé les cellules pour avoir un culot des cellules. Ce culot a été disperser au maximum à l'aide d'un vortex. Le trizol a été ajouté sous une haute chimique à température pièce, on a vortexé pour homogénéiser, les étapes subséquentes ont été effectuées à température pièce jusqu'à l'ajout d'isopropanol où une incubation dans la glace de 10 minutes a été effectuée.   [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

Sinon tu peux les repasser sur ta colonne d'extraction, par contre, tu risques de perdre au niveau rendement d'ARN alors tout dépend de ta concentration. Si tu précipites à l'isopropanol, tu risques également de perdre de l'ARN mais si il t'en reste suffisamment pour réaliser une RT PCR ça devrait aller.  [...] Par contre, j'ai des soucis sur un protocole d'extraction d'ARN issus de plasma où là j'ai des problèmes de contamination en sels et des DO vers 230 problématiques.  [...]

[Biologie Moléculaire] protocole extraction ARN (pas de kit, ni trizol)

[Biologie Moléculaire] protocole extraction ARN (pas de kit, ni trizol).  [...] Est ce que quelqu'un aurait un protocole d'extraction d'ARN pour des cellules Hela.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction ARN

Tout depend de ce que tu comptes faire avec tes ARNs. Si c'est juste pour dire ils sont la. pas de probleme. si c'est pour de la quantification, bon courage... a mon avis bosser sur des colonies dont tu n'as aucun moyen de verifier la phase de croissance c'est impossible pour calibrer.   [...] Pourquoi ne pas resuspendre dans du milieu de culture et culotter de suite puis passer à l'extraction ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Conservation ARN

La conservation d'ARN après extraction est possible à la température -20°C en une semaine en utilisant la RNA Later fournie par SIGMA.  [...] est ce qu'il y a un kit de cDNA parce que je veux faire une extraction d'art à partir du sérum et faire la rétrotranscription juste après pour que je puisse le concerné longtemps dans le congelons contrairement à l'ARN qui doit se conserver à moins 80.  [...]

[Biologie Moléculaire] Difficultés pour solubiliser de l'arn

Ce qui se passe c'est que même en chauffant à +65°C au bain marie pendant 25 minutes bien que mon culot se soit désagrégé il n'est pas solubilisé. Probablement qu'il est trop sec. Auriez-vous une solution à me proposer car il faut que je récupère le maximum de mon ARN dans l'objectif d'en extraire les ARNm et de construire une banque d'ADNc. Merci.  [...] En fait j'ai réussi à ressolubiliser une partie de mon culot en refaisant une extraction phénol-chlo. Néanmoins, il me reste une partie insoluble. Pensez-vous que pour faire ma banque d'ADNc je devrais refaire une extraction où je peux travailler avec mon culot dissout En gros, j'ai peur que ne se sont dissoutes que certaines catégories d'ARN, lesquelles je ne sais pas mais c'est possible.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction faible qté ARN

Salut. j'utilise habituelement l'extraction phenol/chlorophorme et glycogene pour extraire les arn des mes cultures cellulaires.. et le rendement est amliore, pas de facon faramiseuse, mais il y a une difference qui justifie l'achat.  [...] Je n'ai jamais eu de problèmes de contamination de phénol donc je ne peux malheureusement t'aider sur ce point. Peut-être le mieux serait d'utiliser les colonnes conçues pour les extractions d'ARN Dispendieuses, mais propres.  [...]