• Forum - Fragments, Site, Restriction

Technique : RFLP

Si le fragment possède un site de restriction X, il est clivé en ce point (par l'enz. de restriction correspondante) et il y aura migration de fragments plus courts que si ce site de restriction est absent (mutation).  [...] je pense comme toi, s'il y a présence de sites de restriction, les fragments obtenus seront plus courts que si les sites sont absents, puisque s'il n'y a aucun site de restriction spécifique à l'enzyme de restriction, le fragment reste entier et donc sa longueur est maximale.  [...]

Carte de restriction de Pcr-GAI

Le problème suivant est de placer les sites de restrictions sur le GAI. imaginons que l'on a 2 fragments sur la moitié 5', un de 200pdb et l'autre de 545pdb (l'addition fait 745 soit la moitié 5') on a un site de restriction mais comment le placer Car on peut partir de 5' vers 3' ou de 3' vers 5'.  [...] J'ai peut être oublié de préciser que je n'ai jamais établi de carte de restriction ^^'. En fait je ne vois pas du tout comment placer les sites de restriction rien qu'en regardant une électrophorèse...Car finalement on aura des fragments de différentes tailles à mettre bout à bout mais dans quel sens.  [...]

[Biochimie] génétique - endonucléases de restriction

Un ADN génomique contenant 40% de guanine est hydrolysé par une enzyme de restriction reconnaissant le palindrome AATT. Quelle est la taille moyenne des fragments générés par l'hydrolyse enzymatique.  [...] Donc la probabilité de trouver un site est (1/4) n avec n la taille du site de restriction. Ce genre de calcul vous amène à conclure qu'une enzyme telle que EcoRI génère des fragments de 4096 pb en moyenne.  [...]

[Biologie Moléculaire] RFLP: génie génétique et diagnostiques

1)comment est ce possible J'ai cru comprendre que l'heterozygote a 3 fragments.les deux fragments(correspondant aux personnes saines) et un autre plus longs(site de restriction modifie,celui du muté).  [...] C'est pas un fragment d'adn en plus c'est qu'entre 2 allèle la séquence n'est pas la meme donc les enzymes de restriction ne les digère pas de la meme maniere.  [...]

[Biochimie] Insertion vecteur

la digestion de restriction. Tu choisis un site unique du vecteur qu'on retrouve aussi dans l'insert, tu digères et en fonction du nombre et de la taille des fragments tu peux dire s'il y a insertion et même si elle est bien orientée.  [...] Ok.merci on a choisi la PCR avec des amorces car la digestion de restriction je ne l'ai pas vu en cour. Par contre l'autre soucis c'est de savoir ensuite si je choisi une PCR/RFLP ou PCR/RAPD car meme avec les avantages et inconvénients des 2 je n'arrive pas à choisir.  [...]

[Biochimie] Preparation et analyse de plasmides

Le nombre de fragments dépend du nombre de site de restriction qu'il y a sur ton plasmide. S'il y a deux sites, tu auras 2 fragments linéaires, 3 sites 3 fragments etc. Le truc c'est que tu auras forcément un mélange des formes non digérées et des formes digérées (voir des formes partiellement digérées).  [...] La carte circulaire comme tu dis (= la carte de restriction) se fait après l'électrophorèse. Tu ne peux pas prédire le nombre de fragments que tu auras (à part si tu connais la séquence complète de ton plasmide).  [...]

[Biochimie] Vecteur d'expression pour une proteine recombinante

Pour ta dernière question, il faut bien sur faire sauter le stop de la stathmine. Il y a plusieurs options. soit tu as un site de restriction bien placé, soit tu places la GFP après et tu modifie le codon stop en mutagénèse dirigée. Truc capital. les ADN codants pour ces deux protéines doivent être insérées dans le vecteur EN PHASE.  [...] Tout a fait, si tu as une carte de restriction tu peux couper a la base pres. Il faut juste avoir un site bien placé. Comme ça tu peux supprimer la fin de ton ADNc et le rabouter a ton autre gène, sous réserve de sites de restrictions bien placés sur l'un et l'autre des fragments et qui permettent un assemblage en phase.  [...]

[Biochimie] Restriction bizarre

ou bien vu que l'echantillon 4 ne semble exister qu'en forme linéaire, il est possible qu'avec PvuII, il n'y ai pas de coupure (si la coupure pour donner la forme linéaire a été faite au niveau du site de restriction que reconnait PvuII), ou alors 2 fragments et donc 2 bandes qui migrent plus loin que la simple forme linéaire du plasmide.  [...] et pour BGIII. minimum 2 bandes (si le site ou a été coupé le plasmide est un des sites de restriction de BGIII) ou 3 bandes. Mais ou ce placeraient elles sur le gel.  [...]

Mémoire en génétique : questions diverses

Merci de votre aide. J'attaque les empreintes génétiques le week-end prochain, donc je risque d'avoir encore des questions ^^. Si vous connaissez des sites/ressources sur ce sujet, n'hésitez pas.  [...] Qu'est-ce-que ces fragments de restriction Les sites de restriction Et les enzymes de restriction.  [...]

Enzyme de restriction et activité étoile!

Sinon, si l'objectif est de n'obtenir que des fragments à bouts cohésifs, c'est une autre paire de manche (pourquoi ne pas essayer une digestion partielle). Ou un clonage qui permettent d'insérer un site de restriction plus commun.  [...] Mon professeur semble être 100% certain que le type d'extrémités ne change pas avec l'activité étoile, seule la grandeur des fragments et la grandeur de la queue simple brin des embouts cohésifs.  [...]