• Forum - Fragments, Bandes, Visible

Acides Nucléiques

Lorsqu'on fait un séquençage d'ADN, avec la méthode de Sanger, on reconstitue le génome ensuite par electrophorèse. Les acides nucléiques ont donc des charges différentes (car on se réfère à la taille de tous les fragments séquences et leurs charges ).  [...] L'ADN est chargé négativement. La séparation se fait en fonction de la taille des fragments qui diffère d'un seul nucléotide entre chaque bandes les plus proches visible sur le gel.  [...]

[Microbiologie] Viabilité d'une bactérie et ARN - Page 2

je pars d'un échantillon de tissu (des fragments d'intestins d'insecte) minuscule (moins que 100 mg) et pas vraiment propre (débrits cellulaires, sang, protéines,...). à la fin de la manip, j'ai trop peu (ou pas) de produit visible au fond du tube (après la dernière centrifugation du protocole, on a théoriquement un culot d'ARN qu'on redissout dans de l'eau), les concentrations lues par le spectro sont, pour la plupart, faibles et les bandes observées sur les gels de cheking à peine visibles.  [...] j'ai conservé mes ARN à -80 C pendant environ 4 mois avant de procéder à la RT. j'ai fait un checking sur gel d'agarose (j'en parlais un peu plus haut) pour les ARN et pour les produits de la RT. j'avais des bandes visibles avec les ARN mais pas pour les présumés ADNc.  [...]

[Génétique] hybridation adn/adn : technique de southern blot

Ensuite, j'ai effectué une électrophorèse en gel d'agarose à 1%. la migration à duré 1heure environ, à 120volts. Le problème qui se pose est qu'à l'issue de la migration, les fragments des différents puits ont très peu migrés, puisqu'à peine 3 ou 4 bandes sont visibles en haut du gel.  [...] Si tes bandes ne descendent pas, c'est peut être aussi parce que tes fragments sont trop gros. Il faudrait essayer un gel moins concentré.  [...]

Elution de protéines d'un gel de polyacrylamide

En premier lieu, j'ai découpé mon gel, mis dans un mélange Laemmli + bétamercaptoéthanol pour la nuit à 37°C puis j'ai réalisé un Western blot avec ces fragments de gel. Le problème c'est que ce n'est visiblement pas reproductible puisque la seconde fois je n'ai pas obtenu de bandes de protéines.  [...] Du coup j'aimerai savoir s'il existe un protocole grâce auquel je peux faire sortir/éluer toutes mes protéines virales de mes parties de gel afin d'avoir quelque chose de liquide contenant mes protéines pour ensuite les faire migrer en Western blot.   [...]

Demande d'aide pour un exercice

Ils peuvent être mis en évidence par le bromure d'éthidium, un agent intercalent qui fluoresce quand on expose le gel aux UV. Les fragments apparaissent alors sous la forme de bandes roses sur le gel.  [...] Le critère de séparation des fragments est leurs nombres de paires de base. L'électrophorèse sépare 11 fragments d'ADN. Grâce à des marqueurs de poids moléculaires, on estime leurs longueurs comme variant de 220 à 260 paires de bases. Les différentes bandes ou fragments identifiées sont ensuite découpées dans le gel d' agarose.  [...]

[Génétique] Plasmide avec ou sans insert ?

Ben en l'etat des choses, tu ne peux pas. Il faut que tu ais une idee tres claire de ce que tu dois en theorie obtenir. Combien de sites de coupure EcoRI et quelle taille devraient etre les fragments attendus Si tu as des bandes en plus ca peut etre.  [...] C'est bien le problème. je ne sais pas si j'obtiens un fragments à 3,1 kb. On est censé comparer avec le marqueur de poids moléculaire, mais on nous l'a donné sans plus d'informations, du coup, je me retrouve avec des bandes de partout et j'essaie de faire une conclusion avec ça.  [...]

problème de visualisation sur gel agarose

Ensuite lorsqu'on me présente le résultat de l'électrophorèse, je ne suis pas sûre d'avoir réelement compris ce qu'il s'est passé. Si le gel permet seulement de faire passer les fragments plus ou moins rapidement, celà voudraitdire qu'après un temps suffisament long ils finiront tous par atteindre la cathode et que les bandes qu'on voit en UV sont simplement un instantané de ce qu'il se passe Je veux dire le gel leur permet de migrer et les bandes que l'on voit représente l'endroit où ils sont en suspension.  [...] J'ai compris merci j'ai néanmoins une autre petite question. pour rendre les bandes fluorescentes, il faut reprendre le gel et le colorer avec un colorant qui s'intercalle entre les paires d'ADN. ça veut dire que dans le gel, les fragments sont callés dans les mailles du gel.  [...]

[L1 BIO] TP Biologie moléculaire

Si oui j'ai un petit problème,avec notre électrophorèse on a ajouter un ladder ( une gamme étalon pour visualiser la taille de nos fragments ) si la carte de restriction est bien donné par l'électro je visualise que mon deuxième site de coupure Xho1 se trouve entre 800 et 1000 paires de bases.  [...] La digestion te donne des fragments d'ADN. L'electrophorèse les classe selon leur taille. Le résultat du gel d'electrophorèse te donne donc seulement des bandes, chaque bande correspond à des fragments de plasmides d'une taille donnée.  [...]

[Biochimie] Séquençage de ddN

c'est plutôt simple si on comprend la méthode de Sanger. L'incorporation de didésoxynucléotides (ddN) arrête la synthèse d'ADN. Habituellement, comment se déplace l'ADN sur un gel d'électrophorèse (n'oubliez pas que l'ADN est chargé négativement en raison des nombreux groupements phosphates) Sachant cela et le principe de base de l'électrophorèse, on peut savoir quel brin est le plus long et lequel est le plus court.   [...] Si tu réalise une électrophorèse d'agarose, on sépare par la taille et donc les petits fragments migrent plus bas que es gros.  [...]

[Biologie Moléculaire] PFGE : électrophorèse en champ pulsé : Plugs

en fait les plugs sont les échantillons préparés, pris en masse dans de la gélose et moulés avant d'être soumis à l'éléctrophorèse par champ pulsé. C'est un terme employé dans les protocoles de PFGE.   [...] je veux demandé une autre chose,restons dans PFGE, quant la photo sera prise et les bandes sont bien claires comment je peux interpretè les bandes.. (c pour mon memoire au fait),comment je décrit la migration des defferents fragments d'ADN des defferents souches.  [...]