• Forum - Fragments, ADN, Plasmide

[Biologie Moléculaire] Vecteur d'expression

Les gènes codant pour une resistance à l'ampicilline par exemple permettent de sélectionner les bactéries qui ont reçu le transgène. Mais pour ce qui est de l'amplification pour obtenir de grandes quantités de plasmide, c'est tout bête mais l'origine de réplication permet de répliquer le vecteur dans une même bactérie ou bien chez les cellules filles aprés mitose.  [...] que du clone recombinant sous l'action de l'enzyme approprié tu trouves 2 fragments d'ADN ton plasmide+insert.  [...]

[Biologie Moléculaire] Manque de fiabilité crible Blanc-Bleu

Je suis en L1 Bio et doit faire un CR de TP sur un clonage de fragments d'ADN du phage Lambda par le plasmide pBluescript.  [...] Enfin il y a aussi des faux négatifs, c'est à dire des clones bleus qui peuvent contenir l'insert car cet insert n'empeche pas la synthèse de la b-gal.   [...]

Plasmide recombinant

J'ai un petit problème en génétique, alors dans plusieurs exercices on me demande de faire la carte de restriction d'un plasmide, suite une simple et ensuite une double digestion, là c'est bon, mais après quand on me dit qu'on hybride le plasmide recombiné après la double digestion avec une sonde formée par l'ADN copie, alors ici j'arrive même pas à comprendre d'ou provient cet ADN copie, autrement dit il est la copie de quel ARNm au juste et puis on me donne la taille des fragments obtenus (après hybridation) et on demande de trouver la taille du fragment et ou il est placé.  [...] Après ligation de ton plasmide, si tu le redigères, les fragments générés ne sont plus les mêmes qu'au départ. Tu as perdu un bout de plasmide, celui qui se trouvait entre les deux sites de restriction utilisés à la base, et ça a été remplacé par ton insert.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutagèse dirigée par PCR

Je suis une étudiante, mon sujet de master consiste à muter un codon, lors de la première PCR j'ai pu obtenu mes deux fragments qui correspondent au poids moléculaire calculé pourtant sans insérer mon ADN dans un plasmide (pGEX4T1) mais le problème j'arrive pas à assembler mes fragments même utilisant la DNA polymerase PFU.  [...] Mon projet consiste à muter 3 codons par double PCR (conversion de UGA à UGG) afin d'exprimer la totalité de la protéine mon problème est. lors de la 1ère PCR j'obtiendrai mes deux fragments souhaités mais lors de l'assemblage par une seconde PCR j'arrive pas à obtenir mon fragment assemblé même en changeant la taq polymérase par pfu dna polymerase, et encore en migrant mon produit de PCR sur gel d'agarose avec la taq je vois une bande qui correspond à mon fragment calculé mais avec la présence des bandes non spécifiques et avec la pfu il n'y a pas eu d'assemblage.  [...]

[Biologie Cellulaire] Enzyme de restriction

Le plasmide X2R contient dans sa séquence 2 sites de restriction BamH2 et 2 sites de restriction Sif1. J'obtiens deux fragments d'ADN après traitement du plasmide par BamH2. Cela signifie que.  [...] Même si on part du fait que la réponse est vrai, le fait qu'il y ai deux fragment n'indique en rien que les deux sites sont proches, a la limite si ils sont diametrallement opposé alors les deux fragments auront la même taille et en gel electrophorese tu ne verras qu'une seule bande bien qu'il y ait deux fragments, et donc si on voit deux bandes on peut dire qu'ils ne sont pas diamètralement opposés sur le plasmide, mais ce ne veut pas dire qu'ils sont cotes a cote pour autant, ils peuvent etre partout sur la plasmide avec pour seule exception d'étre à l'autre bout du diamètre l'un de l'autre,  [...]

électrophorèse sur gel d'agarose

je suis en train de me dire que ça me parait logique que l'intensité de la bande reflète l'abondance... donc dans le cas de mon plasmide digéré, ça voudrait dire que j'ai plus de forme circulaire.  [...] Pour le BET c'est bien le cas, je suppose que c'est pareil pour les autres intercalants de l'ADN. Par contre cette relation marche t'elle que pour les fragments linéaires Une bande correspondant a un plasmide surenroulé ne devrait-elle pas être moins intense du au fait que certaines bases de l'ADN soit inaccessible du a la topologie de l'ADN ou alors est-ce négligeable.  [...]

Expériences en génétique…

Il n'y a pas besoin de connaitre la taille du gène (d'ailleur tu fais migrer de l'ADN ou de l'ARN et pas forcément un gène) car tu fais migrer un marqueur de taille à coté. On utilise l'électrophorèse par exemple pour contrôler les manips que l'on fait. Par exemple si tu veux voir si un gène que tu as voulu insérer est bien présent dans un plasmide, tu peux faire une restriction en coupant dans le gène hypothètique et tu calcules la taille des fragments obtenus en supposant que ton gène est présent.  [...] Les gènes de résistance aux antibiotiques portés par ces plasmides naturels ont été caractérisés il y a un bout de temps, et on les utilise maintenant pour sélectionner les bactéries ayant reçu le fragment d'ADN voulu.  [...]

TP sur les plasmides

On a comme modèle de référence donc un plasmide de type afa-3 d'E. coli. On a fait une simulation de digestion de ce plasmide, ce qui nous a donné plusieurs fragments de plasmide.  [...] Sur nos souches A,B et X on a extrait les plasmides, l'enzyme Pst1 les a digérée au niveau des gènes qui codent pour l'adhésine puis on a fait une électrophorèse sur gel d'agarose (on a donc une migration des fragments d'ADN).  [...]

[Biotechnologie] Ligation

Deux fragments d'ADN (provenant d'ADN plasmidiques différents) sont purifiés puis digérés par Bam HI. Le premier fragment fait 200 bp et le second 700 bp. On veut fusionner ces deux fragments en présence d'ADN ligase.  [...] Au bout de 30 min de ligation, on obtient 7 fragments de 1 à 2 kb et au bout de 8 heures 4 fragments de 1,8 à 2 kb (l'intensité des autres ayant beaucoup diminué).  [...]

plasmide et BAMH1

Il suffit maintenant de se rappeler que le plasmide est circulaire. Tu as un cercle (et pas une droite sinon ça fait 4 fragments) que tu coupes 3 fois =. tu obtiens trois fragments. un issu à 100% du gène inséré et les deux autres qui contiennent un bout du plasmide et un bout du gène inséré.  [...] Et l'intérêt est là. tu cherches parmi tes plasmides lesquels sont recombinants et lesquels ne le sont pas. Tu as ton plasmide, tu le mets avec l'enzyme et tu fais une petite électrophorèse. si tu as 1 seul gros fragment, ton plasmide était sans le gène, si tu en as 3, le plasmide contenait le gène.  [...]