• Forum - Fragment, Carte, Restriction

[Biochimie] Calculer la taille d'un fragment dans une carte de restriction

Dans un exercice, on nous demande de calculer la taille des fragments d'adn produit de la digestion en utilisant les fragment d'adn marqueurs de taille.  [...] en fait non, la taille des fragments est déjà indiqué sur la figure 3. Là en fait, la difficulté de l'exercice est de coupler l'info de la restriction de ton plasmide et insert par l'un puis par l'autre, et de deviner ce qu'il va se passer une fois que je ferai les deux en même temps.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

on met (on insert) les différents fragment dans un plasmide, et c'est là que rentre en jeu les enzymes de restriction, donc quand on dit que le plasmide a un site de restriction BamH1 cela veut dire que c'est cette enzyme BamH1 qui va cliver un bout du fragment du gène.  [...] 1. identifier votre fragment (si l'organisme a déjà été séquencé, voir la carte de restriction et repérer les sites de restrictions absents du fragment).  [...]

[Génétique] hybridation adn/adn : technique de southern blot

j'ai réalisé récemment une hybridation adn/adn par la technique de Southern blot. Lors de la digestion enzymatique, il à été utilisé de l'ADN provenant de phage lambda. Les différents tubes comportaient également de l'eau stérile, du tampon 10X, Ainsi que les enzymes de restriction, (EcoRI et/ou HindIII selon le tube).  [...] Donc dans ce cas, le fragment d'ADN visible au puit 4 à déjà été digéré. puisqu'en regardant ma carte de restriction, je constate que EcoRI permet d'obtenir un fragment de 21 226 pb. Pourtant mon puit 4 ne contient pas d'enzyme, donc pas de digestion possible.  [...]

[Biologie Moléculaire] Réparation mutation, structure Holliday

Lors de l'analyse des allèles dans une famille dans laquelle on cherche la présence d'un fragment connu, On peut utiliser 2 techniques. RFLP ou Carte de restriction, bien que je les connaisse en gros, je ne comprends pas bien pourquoi ce serait plus rapide (ou simple) avec les enzymes de restriction.  [...] C'est vrai qu'il est intéressant de comparer l'élaboration d'une carte de restriction (cartographie à l'aide d'enzymes de restriction) à la cartographie à l'aide des RFLP.  [...]

ADN de séquence inconnue, choix des enzymes de restriction.

Si j'ai un fragment inconnu j'aurais tendance à ne pas essayer de couper mais à utiliser la Klenow ou la TNK4 pour rendre les extrémités du fragment franches. Du coup, j'ouvre le vecteur avec une enzyme de restriction qui génère des extrémités franches, et dont le site de restriction se trouve dans la cassette de clonage, et je ligue.  [...] Comme vous n'avez aucune idée de la carte de restriction de votre fragment, il est déconseillé de digérer par une enzyme, vous risquez de le casser. En revanche, vous pourrez toujours l'insérer dans un plasmide ouvert avec une enzyme générant une extrémité franche, sous réserve qu'il ait lui même les extrémités franche. Or vous ne savez rien de cela.  [...]

Plasmide recombinant

J'ai un petit problème en génétique, alors dans plusieurs exercices on me demande de faire la carte de restriction d'un plasmide, suite une simple et ensuite une double digestion, là c'est bon, mais après quand on me dit qu'on hybride le plasmide recombiné après la double digestion avec une sonde formée par l'ADN copie, alors ici j'arrive même pas à comprendre d'ou provient cet ADN copie, autrement dit il est la copie de quel ARNm au juste et puis on me donne la taille des fragments obtenus (après hybridation) et on demande de trouver la taille du fragment et ou il est placé.  [...] Après ligation de ton plasmide, si tu le redigères, les fragments générés ne sont plus les mêmes qu'au départ. Tu as perdu un bout de plasmide, celui qui se trouvait entre les deux sites de restriction utilisés à la base, et ça a été remplacé par ton insert.  [...]

Carte de restriction de Pcr-GAI

Bon apparemment on dispose de BamHI donc dans ce cas on peut libérer le 5' GAI en utilisant HindIII et BamHI et ensuite le faire digérer séparément par XhoI et BglII si on obtient deux fragments par digestion, on a les deux sites de restriction sur le 5' GAI (donc dépend d'un coup de chance) sinon il faut (pour améliorer la carte de restriction) obligatoirement isoler le 3'GAI avec EcoRI et HindIII et le mettre en contact avec l'enzyme dont on cherche encore le site de restriction.  [...] J'ai peut être oublié de préciser que je n'ai jamais établi de carte de restriction ^^'. En fait je ne vois pas du tout comment placer les sites de restriction rien qu'en regardant une électrophorèse...Car finalement on aura des fragments de différentes tailles à mettre bout à bout mais dans quel sens.  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorèse

Il faut déterminer le nombre de fragments de restriction et leurs tailles pour l'hydrolyse des 2 ADN (ADN1 et ADN2) par les deux enzymes (BamHI et XhoI).  [...] Sinon, oui je sais représenter un site de restriction mais ce que je ne comprends pas c'est que pour l'ADN 2, je vois 6 sites de restrictions sur les résultats théoriques mais seulement 4 ont été représentés sur la carte de restriction.  [...]

microbiologie - CARTE DE RESTRICTION

ps. je te conseillerai plutot de faire une carte de restriction linéaire afin de bien juxtaposer les fragments qui ont été coupés ou non dans la double digestion.  [...] J'espère pysenlit que tu as réussi à solutionner ton exercice. moi je suis confronté à un devoir maison à faire avec une carte de restriction. Sauf qu'à aucun moment ce truc n'est abordé dans le cour qui ne concerne que la réplication et rien d'autre. Donc exercice hors cour (est ce voulu de la part de l'enseigant pour nous forcer à faire des recherches sur un sujet non-abordé ).  [...]

Comment calculer la taille des fragments sur une carte de restriction?

Si c'est le cas je vais faire un autre exo mais dans le sens inverse c'est a dire faire la carte de restriction a partir du profil de restriction et je le mettrai dans mon autre post merci beaucoup.  [...] Avant de faire la carte de restriction avec de nouvelles valeurs je voudrais d'abord utiliser ce que je viens d'obtenir pour refaire la carte de restriction mais je ne comprend pas comment on peut faire. J'essaye sur brouillon mais ça m'a l'air hyper compliqué.  [...]