• Forum - Fragment, ADN, Plasmide, Enzyme, Restriction

génie génétique

Pour répondre mainteant à la question (ouf), tu peux réaliser une cartographie de restriction puis sortir ta petite calculette pour vérifier si ton plasmide à intégrer ta séquence en sens ou antisens.  [...] donc en gros l'enzyme de restriction coupe le plasmide d'un côté et le fragment de restriction d'un coté, les autres cotés sont intacts et les coté coupés s'emboitent.  [...]

Technique Gateway

alors qu'en général la construction de chaque plasmide séparément prend entre 2 jours et... une éternité. (= il y a des plasmides qu'on n'arrive jamais à obtenir).  [...] c'est un système plus efficace que l'ensemble enzyme de restriction + ligase pour faire passer un fragment de DNA d'un plasmide à un autre,  [...]

Enzyme compatible, non compatible

- On dispose de 2 enzymes de restriction compatibles lorsqu'elles produisent des fragments de restriction qui peuvent s'associer par complémentarité des bases si ce sont des extrémité cohésives, mais qu'en est t'il lorsque ce sont des extrémités franches.  [...] - En rapport avec le plasmide. pourquoi est ce que l'on utilise pas la meme enzyme de restriction dans la bactérie pour créer la meme coupure et ainsi faciliter l'insertion du fragment de restriction Pourquoi en utiliser 2 bien qu'elles soient compatibles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Erreur de taille sur SDS-PAGE

Deuxièmement je voudrais savoir si il fallait un distance minimum de part et d'autre d'un site de restriction pour que l'enzyme clive le double brin d'ADN. Là aussi je précise mon idée. J'ai un site de restriction qui se trouve 71pb avant la fin du fragment d'ADN et je voudrais savoir si c'est possible que l'enzyme ne le vois pas.  [...] Pour le SDS je ne sais pas.Mais pour la restriction, il ne devrait pas y avoir de problème.On peut bien creer des fragment PCR avec juste un site de clivage de chaque coté et les cliver ensuite.Je sais pas si mon exemple et très clair, mais toujours est-il que je suis quasi sur que ça ne posera pas de problème.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

J'ai une question en ce qui concerne le clonage avec un plasmide, j'ai cru comprendre quelques trucs mais j'ai peur de m'embrouiller avec la PCR en ce qui concerne les enzymes de restriction.  [...] je crois que je confonds les sites de restriction présent sur le plasmide et les enzymes de restriction que l'on ajoute aux amorces pour faire la PCR.  [...]

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction VS fragment d'ADN

Voilà. l'idéal, si tu peux te le permettre, c'est avoir des sites de restriction différents sur tes amorces sens et antisens, comme ça lorsque tu fais ta ligation, pas de fermeture du vecteur sans insert, et pas df'insert dans le mauvais sens. (Je pense que ton vecteur possède un polylinker.).  [...] J'ai effectivement coupé l'autre extrémité de mon insert avec une autre enzyme pour m'affranchir de toutes les étapes de phosphorylation / déphosphorylation. Et encore, ma ligase a des propriétés de polymérase et est capable de réparer l'ADN avant la ligation, si bien qu'elle peut quand même lier deux extremités cohésives différentes.  [...]

[Biotechnologie] Construction plasmidique

Premièrement je digère un fragment d'ADN génomique avec les enzymes de restriction afin de récupérer le gène à intégrer.  [...] Tu récupère ton gène à intégrer dans ton plasmide en l'amplifiant par PCR, c'est ensuite que tu digére t'es amplifiants en utilisant les mêmes enzymes de restriction que tu utilise pour digérer ton plasmide.  [...]

[Génétique] Principe de la technique RFLP

SVP si quelqu'un pourrai m'expliquer le principe de la technique RFLP ( le polymorphisme de longueur des fragments de restriction de l'ADN ), et comment il sert à l'etablissement des caryotypes ainsi que la detection de certaines maladies génétiques.  [...] Bon tout d'abord un fragment de restriction est un morceau de DNA qui a été coupé par un enzyme de restriction (enzyme coupant le DNA).  [...]

[Biologie Moléculaire] electrophorèse en gel d'agarose

pour les canals 2 3 et 4 j'ai compris que puisqu'il n'y a qu'un site de restriction, le plasmide est ouvert à un endroit et le fragment est toujours de même taille. Mais je ne comprends pas ce qu'il en est du canal 1, le plasmide est pas digéré et on a plein de fragments de tailles différentes.  [...] mais dans ce cas, si je fais agir une enzyme de restriction qui n'a qu'un site de restriction sur le plasmide il faut que la digestion soit complète pour que je n'obtienne que des fragements de même taille et même volume.  [...]

Expériences en génétique…

L'idée c'est plutot de purifier le plasmide dans un premier temps, d'extraire l'insert grace aux enzymes de restriction. Si tu travailles proprement je ne vois pas pourquoi tu aurais du smir infernal. Sur une telle manip' je n'en ai jamais eu moi. La petite technique pour recuperer la bande est plutot sympa je trouve.  [...] J'ai donc un peu repondu de travers à la question en expliquant comment recuperer un gène introduit dans une bactérie grace à un plasmide. Dans ce cas là, comme on connait le plasmide, il n'y a pas à chercher à identifier le gène. On connait la taille du fragment de restriction, c'est tres simple.  [...]