• Forum - Fragment, ADN, Intérêt

[Génétique] Inconvénient de la PCR

La technique présente cependant un inconvénient, puisqu'elle amplifie non seulement l'ADN étudié, mais aussi un ADN étranger qui viendrait le contaminer, faussant alors toute l'analyse.  [...] Les contaminations arrivent vite, car une très petite quantité va être amplifiée en même temps que le fragment d'ADN d'intérêt.  [...]

[Biotechnologie] recombinaisons site spécifiques par la technologie Gateway

dans un plasmide jouant le rôle de vecteur donneur et un fragment d'adn contenant le gène d'intérêt flanqué par deux autres sites attB1, attB2 (produit par PCR).  [...] Après recombinaison, le gène d'intérêt a donc été transféré sur le plasmide donneur est cette fois flanqué de deux sites attL1 et attL2 qui sont les produits de la recombinaison. c'est le clone d'entrée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Southern blot !!!

On veut donc que ce soit l'ADN de sperme de saumon, et non notre sonde, qui se fixe non spécifiquement à notre membrane, d'où cet ajout en quantité saturante.  [...] je ne crois pas que l'adn de saumon soit en quantité saturante. Il ne faut pas oublier que ton fragment d'intérêt a migré sur un gel, et est donc concentré sur une petite surface, ce qui n'est pas le cas de l'adn de sperme. Je seche un peu quand même parce que c'est plus vraiment une technique d'actualité.  [...]

[Biochimie] Gateway technologies

Dans le même ordre d'idée, eais làn utilisant de la BP clonase plutôt que de la LR clonase, on peux faire la réaction inverse, mais là encore, je vois pas très bien l'intérêt. C'est juste pour avoir notre fragment d'intérêt sur un vecteur avec une résistance à la Kanamicine plutôt qu'à l'Ampicilline.  [...] Pour commencer tu réalise une première recombibaison avec ton entry vector et ton fragment d'ADN d'intérêt flanqué des attb1/2.  [...]

[Biologie Moléculaire] Question teste de paternité pour exposé universitaire

Avant, il s'agissait de RFLP en utilisant des enzymes qui coupent fréquemment afin d'avoir quelque chose d'hautement polymorphe.   [...] Maintenant on teste le nombre de répétition en tandem par PCR. Les sites polymorphes d'intérêt sont déjà connus (puisque l'ADN humain est séquencé), donc il suffit de designer des primers en amont et en aval de ces répétitions et de regarder la taille du fragment amplifié.  [...]

[Biologie Moléculaire] Séquencer un long fragment d'ADN

Voila, j'ai voulue séquencer un long fragment d'ADN et pour obtenir la séquence complète, j'ai amplifié la séquence d'intérêt avec une amorce Forward et une amorce Reverse.  [...] je te conseil d'allez directement sur le logiciel blast 2 sequence du NCBI. Tu aura juste à rentrer tes deux séquences sans rien faire d'autre. Et il te dira si sa se chevauche (si tes séquences sont très très longue je te conseil d'augmenter ou de diminuer la valeurs d'un mot).   [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

Ainsi, en ajoutant de l'ampicilline au milieu, seules celles avec un vecteur survivent. Vous sélectionnez les bactéries transformées, pas nécessairement celles qui contiennent votre fragment d'ADN d'intérêt.  [...] Ce sont les mêmes. Si vous souhaitez cloner dans le site BamHI d'un vecteur et que votre fragment d'ADN ne porte pas de site BamHI, vous allez créer des amorces PCR contenant NNNNNN-BamHI-extrémité5'dufragment et NNNNNN-BamHI-extrémité3'dufragment (antisens) Votre fragment amplifié sera NNNNNN-BamHI-fragment-BamHI-NNNNNN et vous pourrez générer votre fragment avec des extrémités BamHI libres qui pourront liguer avec celles de votre vecteur.  [...]

marqueurs de sélection

deuxièment, si il faut que la cellule hote soit mutée et qu'il faut utilisé un marqueur pour détecter qu'elle a une mutation et qu'elle a bien recu le fragment d'ADN puisqu'elle continue a vivre, celà veut dire qu'on ne peut pas inséré n'importe quel gène d'interet à une cellule hote.  [...] mais le gène d'intérêt ce n'est pas le gène qu'on veut obtenir en grande quantité Je pensais que dans ce fragment qu'on insérait il y aura ce qui code pour la protéine qu'on veut et puis un fragment de gène impliqué dans la reconnaissance avec le marqueur.. ce n'est pas le cas alors.  [...]

[Biochimie] differencier deux gel d'agarose de concentration différente

Concernant la fin du message, utiliser une concentration forte permet de mieux retenir les petits fragments, c'est donc indiqué lorsq'on a des fragments de taille inférieure à 150 pb. On perdra alors les plus gros, qui migreront très peu (voire pas du tout) et ne seront pas séparés.  [...] A l'inverse il faudra que le gel soit peu concentré pour séparer des gros fragments (simplement pour leur permettre de passer à travers du gel), mais dans ces conditions on perdra les petits fragments qui migreront tellement qu'ils risquent de sortir. Tout est affaire de choix par rapport à ce que tu souhaites faire migrer, pour l'ADN il existe des tableaux indicatifs donnant la gamme de pourcentage en agarose adaptée en fonction de la taille du ou des fragment(s) d'intérêt.  [...]

[Génétique] Polymerase chain reaction

Aussi, j ai appris que la PCR en temps reel permet de quantifier precisement un fragment d adn d'interet present initiallement dans un echantillon, je ne comprend pas comment (Je comprends que cette technique permet de voir le nombre d'adn en temps reel mais comment obtenir la quantite initiale).  [...] Pour la qPCR, lorsqu'on est en phase d'amplification, c'est à dire avant de saturer le système, la quantité d'ADN néosynthétisée par la réaction est proportionnelle à la quantité initiale (plus il y en a au début, plus on en amplifie, plus on le détecte tôt).  [...]