• Forum - Fonction, Protéine, Levure

[Génétique] Experience temoin gene delete

Voila je travaille sur la fonction d'une proteine chez la levure. J'ai suivi la croissance de deux souches (sauvage et mutee*, la mutation correspondant a la deletion de la proteine etudiee) et observe une difference du taux de croissance. Bref.  [...] Pour me constituer un temoin, mon tuteur de stage m'a demande d'apporter via un plasmide le gene de la proteine etudiee dans la souche deletee (et donc normalement retablir le phenotype sauvage. Et ainsi s'assurer que la difference observee entre ces deux souches est bien due a la deletion de la proteine et non pas a un effet que pourrait avoir le fait d'enlever simplement le gene (pour exemple deregler un autre gene).  [...]

[Biotechnologie] Bloquer l'expression d'un gène chez la levure

Pour l'IPTG je ne suis pas certain qu'il fonctionne chez la levure... je rappelle a toute fin utile que c'est un promoteur bacterien. y'a peu de chance qu'il fonctionne dans la levure, surtout qu'il necessite la presence de la protéine LacI pour etre réprime.  [...] le probleme que j'ai un production de ma proteine mais elle reste toujours dans la levure et ne sorte jamais.c'est dans les tois types de plasmides.  [...]

[Biochimie] Culture de levures

Comme tout microorganismes ils ont besoin avant tout d'une source de carbone (source sucrée donc sucre, mélasse, dextrose...) et d'une source d'azote (hydrolysat de protéine, amoniaque...) les choix sont différents en fonction des souches ça doit être relativement bien documenté concernant le milieu de culture de la levure de boulangerie.  [...] Comme toute cellule vivante, les levures ont besoin de protéines ( donc d'azote ). Les levures présentes dans les mouts pour faire le vin ont besoin de au moins 150mg/L d'azote.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western sur protéine membranaire

Je cherche a effectuer un western sur un extrait de protéine de levure (donc difficile a casser). cette protéine a la particularité d'etre accrochée et retenue a la membrane vacuolaire (ainsi qu'au RE).  [...] Je fais tous mes western sur une protéine membranaire (mais de cellules humaines et pas de levure) en Laemli (je n'ai jamais su l'écrire) ou d'autres tampons style Guanidium, urée, RIPA,... Ca ne marche pas le Laemli chez la levure Est ce que tu as essayé de casser au dounce.  [...]

[Biologie Moléculaire] identification d'un gène

Ensuite, il me faudra faire exprimer ces deux vecteurs dans deux cultures bactériennes (ou de levure, en fonction du caractère plus ou moins capricieux des protéines eucaryotes), purifier ces protéines sur billes d'agarose couplées au glutathion et analyser ce qui sort.  [...] Après tu peux commencer une étude fonctionnelle = tu sais que tel gène muté entraîne une maladie, mais pourquoi Mais c'est une autre question, je crois. Et là effectivement tu va passer à la production d'anticorps à partir de ta protéine (soit fait maison, ce qui est pénible, soit en commandant l'anticorps idoine chez felix potin).  [...]

fermentation panaire

ce calcul doit être fonction de la température pâte, de la quantité de levure, de la farine (dont sa composition est connue), et si possible, du taux d'hydratation et de la quantité de sel.  [...] on part d une recette de base. farine eau sel levure, et en fonction de la température et du taux de levure, on trouve l'instant t pour mettre au four.  [...]

[Biologie Cellulaire] Détergent pour cellule humaine

je suis confrontée à un problème. je travaille sur l'expression d'une proteine virale dans des cellules humaines que je ne parviens pas à solubiliser après extraction des protéines cellulaires. Un protocole est déjà au point pour l'expression chez la bactérie et la levure et cette étape de solubilisation permettant d'extraire la protéine des membranes fonctionne et pour cela nous utilisons du Chaps.  [...] Je pense que la question était surtout. est ce qu'un protocole pour levure ou bactérie fonctionne en cellule mammifère non.  [...]

[Génétique] Systeme GAL4/UAS

la protéine GAL 4 est une protéine de levure. C'est un facteur de transcription. On a découvert, chez la levure toujours, une séquence d'ADN (minimale) qui placée devant une séquence codante (quelconque) suffit à déclencher sa transcription, en présence de la protéine gal4.  [...] Résultat. par exemple, si je croise la souche GMR-gal4 qui s'exprime dans les yeux de la drosophile, avec la souche UAS-gfp, j'obtiendrais des individus qui ont les deux transgènes et dans leurs yeux, la protéine GAL 4 activera la transcription de l'UAS-gfp, après traduction par les ribosomes, on aura des protéines fluorescente GFP dans les cellules des yeux.  [...]

[Biologie Cellulaire] Pharmacologie moléculaire

C'est pour la production de protéines recombinantes. Un système d'expression correspond à l'organisme que tu utilises pour exprimer ta protéine (bactéries, levures, cellules d'insectes...). Lorsque tu produits une protéine dans l'organisme où elle est présente naturellement (par exemple si tu produits une protéine humaine dans des cellules humaines ou une protéine de coli dans E.  [...] coli ), on parle d'expression homologue. Mais si tu produits une protéine humaine dans une levure, ou une protéine de levure dans une bactérie par exemple, tu utilises alors un système d'expression hétérologue.  [...]

[Biochimie] Immunoblotting, anticorps

la protéine existe bien chez la levure sauvage si oui, pour vérifier que la construction de la protéine mutée ou sauvage s'exprime bien, il faut pouvoir la différencier de celle que la levure produit naturellement.  [...] OUh, pas évident... quand on n'a pas la structure 3D, on peut fonctionner par analogie avec des protéines déjà caractérisées. Sinon je ne vois pas.  [...]