• Forum - Fixation, Anticorps, Protéine

[Biologie Cellulaire] Notion de contrôles, contrôles isotypiques, culture cellulaire

Pour moi, il s'agit d'un contrôle permettant la vérification de l'absence de fixation non spécifique d'un anticorps, que l'on effectue en incubant une IgG dirigée contre une protéine jamais exprimée dans la cellule qui nous intéresse. Ainsi, on vérifie l'absence de fixation non spécifique et donc la spécificité du marquage effectué avec l'anticorps dirigé contre la protéine que l'on veut localiser.  [...] Bah si l'anticorps qui cible votre protéine d'intérêt est un IgM, l'anticorps contrôle doit être un IgM. Si il s'agit d'un IgG, le contrôle doit être un IgG.  [...]

Immunoprécipitation de la chromatine

Le protocole donné est. extraction de l'ADN depuis la cellule puis isolation de la chromatine que l'on souhaite- on retire les protéines fixées dessus puis on séquence l'adn.  [...] La ChIP permet d'identifier le site de fixation d'une protéine sur l'ADN. Il faut posséder l'anticorps spécifique de la protéine qui t'intéresse (ou alors exprimer une protéine taggée dans ta cellule et avoir un anticorps anti-tag). Donc tu extrais les complexes ADN/protéines des cellules, tu les découpes en courts fragments (qq centaines de paires de bases par exemple pour commencer) tu incubes avec ton anticorps.  [...]

[Immunologie] VIH et CPA

le corps créé des anticorps aléatoires il me semble, avec des sites de fixation d'antigène (paratope) de structure aléatoires pour. au cas ou un de ces anticorps fixerais une protéine de l'antigène,  [...] Il y a actuellement des travaux visant à mettre au point un vaccin ciblant une région conservée de gp41 mais je ne vois pas comment un anticorps pourrait y accéder et ça risque donc d'échouer.  [...]

Méthode Elisa

il faut fixer les protéines du virus au fond de puits, verser le sérum à tester dans ceux-ci. il y a alors fixation ou nn des anticorps sur la protéine puis on révèle la présence des anticorps grâce à des molécules couplées à une enzyme.  [...] 3) étape 3. ajout d'anticorps anti-A (différents des premiers Ac utilisés) (ces Ac sont appelés Ac de détection). l'antigène se trouve pris en sandwich entre l'Ac de capture et l'Ac de détection.  [...]

[Biochimie] Etude des partenaires protéiques : Co-Immunoprécipitation, Tap-Tag et double hybride

Et je me posais la question de savoir quel type d'anticorps fallait-il utiliser pour la Co-Ip Un anticorps poly ou monoclonal Si j'utilise un anticorps polyclonal, il risque de se fixer un peu partout sur ma protéine et je risque d'empêcher les interactions.  [...] co-immunoprécipitation. technique in vivo donc c'est bien, il y a le problème des anticorps qui peuvent en effet prendre un site de fixation d'un partenaire de la protéine.  [...]

[Biologie Cellulaire] Co-Immunoprécipitation

donc que B interagit avec A. Pour controler, tu reincubera la membrane avec un anticorps anti A pour vérifier la présence de la protéine A (sinon cela signifie que ton IP n'a pas marché, donc il est normal que tu ne vois pas B).  [...] Tu peux aussi immunoprécipiter avec un anticorps anti C (autre protéine connu pour ne pas interagir avec A ni B), et vérifier la présence de A ou B. Si tu détectes A ou B, cela signifie que tu as une fixation aspecifique de ta protéine sur les billes, que tes lavages n'étaient pas bons.  [...]

[Immunologie] protocole immuno-histo-chimique

c'est la révélation. ton anticorps secondaire est couplé a une peroxydase, qui transforme le DAB en un produit coloré, donc localisé la ou Ki67 se trouve (d'ou l'intéret d'inactiver les perox. qui trainent un peu partout).  [...] Pour les peroxydases endogènes, ce sont les peroxydases qui sont présentent dans ton tissu avant que tu n'ajoutes ton anticorps couplé à la peroxydase. Ces peroxydases endogènes utiliseraient la DAB exactement comme ton système de révelation et génereraient du bruit de fond.  [...]

Différence de fixation des cellules

Bien souvent les différences de résultats entre les modes de fixation dépendent de l'anticorps utilisé et de la protéine visualisée. Certains Ab ne donnent aucun résultat en méthanol et s'utilisent exclusivement en PAF alors que pour d'autres c'est l'inverse.  [...] Avec le methanol, la fixation s'effectue par deshydradation (denaturation des proteines) alors qu'avec les aldehydes (formaldehyde, glutaraldehyde) on conserve la structure 3D de la proteine (fixation par pontage). Donc effectivement, si tu utilises un anticorps conformationnel, la detection de ton antigene sera impossible apres une fixation en methanol.  [...]

[Biochimie] Cherche matériel scientifique intéressant pr exposé!

Je pourrais te proposer autrement le biacore (résonance plasmonique de surface), pas mal pour étudier l'interaction entre deux protéines et les techniques d'immunologie (coimmunoprécipitation, western blot etc.), très très utilisées dans les labos (malgré le prix des anticorps ).  [...] -Le moins complexe. les techniques d'immunoprécipitation et coimmunoprécipitation. Beaucoup d'autres techniques d'immunologie comme le test ELISA ou l'immunofluorescence sont extrêmement simples à comprendre (c'est toujours le même principe de fixation d'un Anticorps spécifique sur une protéine).  [...]

[Biologie Moléculaire] Immunocyto - Comment améliorer la fixation ?

Je pensais allonger le temps de fixation ou la concentration de la solution de fixation mais j'ai peur que l'anticorps ne reconnaisse plus correctement ma protéine.  [...] Ensuite, pour faire l'hybridation de l'anticorps, je dépose mes lamelles sur des petits capuchons. Au final, ca permet je pense d'utiliser moins d'anticorps mais surtout de les monter facilement sur lamelle.  [...]