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[Biochimie] Linker, enzyme de restriction and co

En outre, notre prof a précisé que la DNA ligase coupait aussi bien les extremités franches que cohésives mais qu'il était préférable que ce soit des extrémités cohésives, je n'ai pas bien compris pourquoi.  [...] Enfin qu'est ce que le polissage des extrémités La prof nous a parlé d'une méthode où on avait méthylation des sites EcoR1, polissage des extrémités puis addition de linkers. Je n'ai pas très bien compris à quoi servait cette méthode.  [...]

[Biologie Cellulaire] Depolymerisation des microtubules

Un MTB se dvpe à partir d'un anneau initial de 13 molécules de tubuline. les dimères de tubuline s'joutent un par un  [...] . In vitro, dans un solution de tubuline pure, les dimères de tubuline s'ajouterons à l'une ou à l'autre des extrémités d'un MTB en construction, bien qu'il s'ajouterons plus rapidement à l'ext + qu'à l'ext - (ce qui explique le nom de ces extrémités).  [...] J'ai trouvé plusieurs sites internets qui disaient qu'il y avait bien polymerisation/depolymerisation au niveau des extrémités moins. J'essaierai de demander à mon prof de bio.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage - Page 2

Tout simplement car il n'y a aucuns sites de restrictions (qui puissent convenir) aux alentours...les deux sites de restrictions que j'ai besoin de placer aux extremités servent a isoler les cassettes que j'ai besoin de recuperer si je m'ecarte je vais amplifier au passage donc des parties que je n'ai pas besoin et qu'il me sera dur d'enlever apres.  [...] je suis bien d'accord, mais ces sites vont etre au niveau des morceaux de genes aux extremités que je ne veux pas donc certes apres restrictions ils seront amputés et donc pas fonctionnel mais il y aura toujours des morceaux donc c'est pas très propre, les deux sites uniques que j'ai mis juste pour cadrer la sequences que je veux ont ce role, d'eviter d'avoir les parties aux exterieurs.  [...]

[Biotechnologie] Race PCR

D'après mon cours, cette méthode permet de déterminer les extrémités 3' et 5' des ARNm, mais je ne vois pas comment en pratique cette méthode le permet.  [...] - On ajoute une RT avec une amorce antisens interne qui se fixe à l'ARNm (on essaie d'en prendre une qui sera le plus proche de l'extrémité 5' de l'ARNm).  [...]

PCR, template et riz anti-alzheimer

3) La découpe aux sites de restriction permet a) de récupérer le gène AB d'intérêt et b) de l'insérer dans les mêmes sites de restriction sur le plasmide commercial.  [...] 3) les sites de restriction permettent en effet que les extrémités de tes morceaux soient cohésives. Donc on peut extraire un fragment entre certains sites, et si on choisit bien son plasmide receveur, l'insérer de facon orientée.  [...]

plasmide et BAMH1

Tu as un plasmide recombinant donc il possède le gène. Une fois qu'on l'a, on met l'enzyme Bam H I. Sur le plasmide recombinant il y a donc 3 sites de restriction Bam HI. celui du plasmide seul et les 2 du gène qui est dans le plasmide. Donc trois coupures.  [...] Et l'intérêt est là. tu cherches parmi tes plasmides lesquels sont recombinants et lesquels ne le sont pas. Tu as ton plasmide, tu le mets avec l'enzyme et tu fais une petite électrophorèse. si tu as 1 seul gros fragment, ton plasmide était sans le gène, si tu en as 3, le plasmide contenait le gène.   [...]

[Biologie Moléculaire] Site de restriction

Je vais cloner un gène dans un vecteur (pET21a et pGEX 4-T-2) et je vais ajouter des sites de restrictions dans mes primers avant de lancer la PCR. Quels procédures peut-on suivre pour faire introduire des sites de restrictions dans les séquences de nos oligonucléotides dans le but d'une expression dans Ecoli par exemple le sens de lecture du vecteur/lecture en phase, présence de ces enzymes dans polylinker, enzymes ne coupent notre gène.  [...] Il ne faut pas oublier d'ajouter des nucléotides supplémentaires aux extrémités des oligos si on veut etre certains que les sites soient coupés.  [...]

Structure d'un phage

Mais ou se trouve la fameux site cos qui rend possible l' empaquetage de l'ADN dans la capside et à quoi sert t il dans le clonage.  [...] Les sites COS sont de l'ADN, ce sont les deux extrémités simple brin de génome phagique. Et le génome est dans la capside.  [...]

[Biologie Moléculaire] Principe des banque génomique/cDNA

On ne parle pas de dégradation par des enzymes de restriction, mais de digestion. La différence est quand même notable. avec le terme dégradation je signifie le fait que je pars d'une macromolécule (ADN) pour me retrouver avec des nucléotides à la fin. Alors que le terme digestion signifie que je vais couper à certains endroits pour me retrouver avec des fragments de tailles différentes.   [...] Etant donné que les sites EcoRI sont un peu partout au sein de ce génome, on se retrouvera avec des bouts de tailles différentes, ayant tous le même type d'extrémités. celles générées par EcoRI.  [...]

[Biochimie] Destruction des ponts disulfure

Je cherche à détruire (ou oxyder) les ponts disulfure d'un mélange de protéine, et ce d'une façon que je puisse ensuite ajouter ma sonde fluorescente qui reconnait les thiols (extrémité S-H). Et pour compliquer les choses un peu plus, je ne peux pas avoir plus de 2 étapes, ne peut pas chauffer au delà de 50-60°C, et je préférerai que ma sonde fluorescente reste fluorescente. Oui, un vrai challenge.  [...] Je me demandais donc si vous connaissiez une méthode pour oxyder les ponts disulfures d'une protéine d'une telle façon que ma sonde puisse réagir ensuite avec les extrémités SH nouvellement créées.  [...]