• Forum - Extrait, Mélange, ARN

[Biologie Moléculaire] Problème de produit PCR d'ARN (ADNc)

Je suis nouvelle et je recherche de l'aide. je viens de purifier un extrait mélangé d'amplicons d'ARN (après RT-PCR) puis j'ai fait une migration sur gel d'agarose 3%-TBE 1X mais il n'apparait aucune des bandes attendues. Or, avant de mélanger ces extraits, ils ont présentés des jolies bandes.  [...] et mon but étant d'isoler ces bandes pour une extraction. Quel pourrait être mon problème.  [...]

Beljanski - Page 2

A partir de la variété de bactérie Escherichia Coli K12 connue pour être non pathogène, Mirko Beljanski a trouvé une façon naturelle d'extraire ces fragments d'ARN (extrait ribonucléique d'ARN).  [...] - Ensuite, Kinette a en effet mal interprété la phrase Mirko Beljanski a trouvé une façon naturelle d'extraire ces fragments d'ARN (extrait ribonucléique d'ARN).  [...]

[Biologie Moléculaire] pb dosage ARNtotal spectro

Bonsoir, j'ai un pb concernant mes extractions d'ARNtotal. Je travaille sur des cultures pures de Fusarium langsethiae et coculture F.langsethiae/Geotrichum candidum.  [...] Je me dis que peut-être le kit n'extrait pas l'ARN de façon optimale, ce qui expliquerait que je ne puisse pas le doser au spectro.  [...]

[Biochimie] Extraction ARN

Je pense donc, qu'il faut que je refasse migrer tous mes ARN que j'ai extrait en faisant au préalable une nouvelles solubilisation car il faut que mes ARN soient ok pour que je continue ma manip.  [...] Et bien si ça marche tant mieux, alors essayer de mélanger à des intervalle de 2 min en pipettant. Et n'oubliez par le temps de séchage de l'éthanol réduisez le au maximum si possible.  [...]

problème d'analyse de gel de migration

je cherche a amplifier un cDNA fait a partir d'ARN. les deux amorses sont vraiment spécifique a cet endroit, je les ai blasté avant de l'utiliser. en gros je veu amplifier un cDNA de 700 bp a peu pres donc des oligo a chaque bout pour la pcr et normalement pas de probleme d'hybridation ailleurs que la.  [...] SI ton ARN initial est extrait d'un tissu, ne peux-tu pas avoir des variants d'épissage, tout bêtement Dans ce cas tu aurais plusieurs ADNc suite à la RT.  [...]

[Biochimie] qPCR :

Sachant que je sais que cette proteine est exprimée dans l'organe d'où j'ai extrait l'ARN, et que mon ARN (et mon ADNc) est de bonne qualité, je ne comprends pas pourquoi au bout de la 3eme paire de primers designées j'arrive toujours pas a amplifier mon gene d'interet.  [...] Il se peut que le problème vienne de l'age de la souris, j'ai regardé dans des papiers, et c'est vrai qu'ils ne precisent pas l'age des souris d'ou ils ont extraits l'ARNm, à part dans un des articles où ils prelevent les testicules dans des souris de moins d'un mois alors que moi je l'ai fait chez une souris qui devait avoir 2mois et demi.  [...]

[Microbiologie] Viabilité d'une bactérie et ARN

Ils m'ont dit également que le but premier de son amplification (et de sa quantification) est de calibrer une manip au cours de laquelle on a extrait de l'ARN…..en gros pour voir si la technique d'extraction a bien marché (et pas pour apprécier la capacité réplicative d'une bactérie).  [...] Si ca risque de poser un probleme. d'un autre coté, si tu utilises 1ul de ton extrait d'ARN dans 20ul final. Il y a des chances que ton inhibiteur soit suffisament dilué pour ne pas inhiber totalement la RNAseA (d'autant qu'en general tu n'utilises pas des tonnes d'inhibiteur), ca depends des concentrations, mais de toute maniere l'inhibiteur n'est jamais suffisament efficace pour bloquer totalement les RNases.  [...]

Beljanski - Page 3

Et de toute façon, l'ARN silencing par injestion d'ARN, ça reste du jamais vu (pour ne pas dire du n'importe quoi... surtout de l'ARN silencing à partir d'ARN extrait de bactérie, qui aurait un effet spécifique sur la multiplication des plaquettes).  [...] Beljanski a apparemment écrit à Temin pour dire moi j'ai fait quelque chose sur le sujet, à propos d'un article sur la réverse transcriptase de bactérie (pas la réverse transcription en général, déjà pas mal décrite et qui est associée au prix nobel), et en scientifique honnête (et certainement ne souhaitant pas avoir d'ennuis), Temin, qui avait apparemment affirmé que personne n'avait mentionné ceci, a publié une rétro-citation.   [...]

[biologie moléculaire] qualité d'ARN

J'aimerai faire une électrophorèse en gel d'agarose pour faire un test qualitatif concernant mes arn extraits puis congelés dans de l'eau RNase free.  [...] Merci pour les infos sur les ratios et contaminations. Cependant j'ai extrait l'ARN avec midi kit qiagen et je ne connait pas exactement la composition des tampons (je ne crois pas qu'il y ait du phénol).  [...]

[Biochimie] milieu de culture

Maintenant si le sang que vous désirez utiliser est au réfrigérateur, ne le mettez pas au bain marie car cela risquerai de le dénaturé, ajouté-le au milieu suite à l'autoclavage du milieu.   [...] C'est le cas lorsqu'on prépare une gélose au sang. on autoclave 20minutes à 120°C un mélange de protéose-peptone+extrait de foie+extrait de levure+chlorure de sodium+gélose, puis on ajoute éventuellement 5 à 10% de sang de cheval défibriné stérile au milieu en surfusion. Puis répartir en boites de Pétri.  [...]