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Problème d'extraction d'ADN

Je me permet de vous solliciter pour un problème d'extraction d'ADN que j'ai rencontrer. J'utilise la méthode d'extraction sur colonne de gel de silice à partir de prélèvement de sang total congelé. Le hic, c'est en voulant décongeler mes prélèvement trop vite, j'ai accidentellement coagulé le sang total.  [...] La coagulation étant due à l'albumine je suppose(70°C). Ma question est la suivante. Y'a-t-il un moyen de sauver mes prélèvements Y'at-til un traimtement que je peux leur faire subir pour pouvoir quand même en extraire de l'ADN ( le principal problème du sang coagulé c'est que ça bouche la colonne, ce qui rend la séparation du lysat par centrifugation impossible).  [...]

extraction phenol chloroforme

je veux savoir est ce que je peus faire un extraction phenol chloroforme de l'ADN viral à partir du sérum et non pas du sang total.  [...]

[Biologie Moléculaire] EXTRACTION ARNt

Bonsoir, je viens de me lancer dans des expériences d'extraction d'ARNt à partir du sang total.dans ma première extraction j'ai obtenu un randement de 2,1 (DO260=0,069) avec une concentration de 69ug/ml qui me parrait faible. dans l'étape de rétrotranscription selon le protocol je dois prendre 1ug/ul d'ARN alors que mon échantillon a une concentration faible(0,069ug/ul), je ne sais pas quoi faire dans ce cas, est-ce que je peux doubler de volume pour régler ce probleme.  [...] une autre question me préoccupe, la valeur de 69 est la concentration, alors comment déterminer la quantité de mon ARNt.   [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ADN Plasmodium

Je suis doctorant en parasitologie, une partie de mon travail repose sur la PCR de plasmodium. Le problème c'est que j'ai pas trouvé dans la bibliographie un protocole d'extraction d'ADN parasitaire depuis le sang total, j'ai trouvé seulement des méthodes utilisant des kit d'extraction tel que QUIgen.  [...] extraction de l'ADN totatal par l'un de ces deux protocole puis ensuite PCR avec des amorces spécifiques de Plasmodium, ca devrait faire l'affaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Meilleure technique d'extraction ?

Perso, je faisais une extraction phénol-chlo après les étapes de déplétion (je travaillais sur du sang total) et puis, plusieurs amplification de génomes totaux de pathogènes avant d'hybrider sur la puce.  [...] bonjour, j'ai recueillis du sang total humain en présence d'EDTA, j'ai commis une faute en conservant ce sang à -80°C ce qui provoquera une hémolyse, est ce que je peux, comme même, extraire l'ADN à partir ce sang congelé SVP il n'ya pas une solution j'ai besoin d'aide.  [...]

[Divers] L'extraction d'ADN

- l'extraction différentielle. il s'agit ici de séparer de l'ADN provenant de deux fractions différentes. Exemple le plus courant. mélange de cellules épithéliales (fraction féminine) et de spermatozoïdes (fraction masculine) que l'on peut retrouver sur des prélèvements de type préservatifs, écouvillons vaginaux.  [...] Petite précision supplémentaire. les extractions réalisées à partir de traces ont toujours un plus faible rendement. En cause. la faible quantité d'ADN et une plus ou moins bonne qualité (dégradation, mélanges, inhibiteurs de PCR, etc).  [...]

[Biochimie] migration sds page

je fais une extraction de cytosol total sur des plaquettes sanguines et je les dénature en les faisant bouillir avec un tampon glycérol/SDS avant de les faire migrer.  [...] je ne connais pas le kit d'extraction que tu utilises mais est ce que ça ne serais pas plutôt lui qui est pourri. Je veux dire, pour une raison ou une autre (trop vieux, pas bonnes conditions de stockage...) est ce que le pH des tampons de ton kit n'aurait pas varié, ou il n'y aurait-il pas eu précipitation ou concentration (du a une évaporation) en sel (je parle toujours des tampons).  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN total sur fourmi unique

je cherche à extraire l'ARN total à partir d'une fourmi unique, dont je dois tirer 4-5 µg. J'utilise la méthode Trizol-chloroforme, mais j'ai toujours un problème de pureté, spécifique à la fourmi. J'ai un pic d'absorbance à 220-230 nm, dont je n'arrive pas à me débarrasser.  [...] je ne sais pas, je parlais de protéinase K pour mieux dissocier la structure de la bestiole. Que tu aies ou non de la contamination protéique, ca peut éviter d'entrainer des saloperies.   [...]

[Biologie Moléculaire] PCR quantitative

Quand j'avais un couple d'amorces qui me donnait 2 pics dans les conditions classiques, je l'éliminais d'office. Il faut dire que je travaillais dans le contexte d'une famille multigénique dans laquelle certains gènes étaient quasiment identiques. Je ne pouvais donc pas savoir si le 2e pic correspondait à un dimère d'amorces ou à la détection d'un autre gène (je travaillais en SYBR Green).   [...] Ceci dit j'arrivais à détecter des expressions très faibles avec mes PCR de 40 cycles (sur GeneAmp 5700). La plus faible a été 23 copies/ng ARN total.  [...]

Extraction de l'ADN

bonjour, j'aurais voulue savoir s'il existé un autre protocole pour faire une extraction de l'ADN dans le sang qui n'utilise pas de phenol-chloroforme merci.  [...] Il existe des kits tout pret pour extraire l'ADN du sang directement, ils sont produits par Qiagen, par contre je ne me souviens plus du tout de la référence, ça doit être un truc du genre dneasy tissue extraction.  [...]