• Forum - Extraction, Protéines, Tampon, Phosphate

[Biochimie] SDS page

et pourquoi tu n'a pas commencer deja par une extraction des protéines totales avec le tampon phosphate.  [...] Merci de m'indiquer comment je procède à l'extraction des protèines avec le tampon phosphate. Et quel est l'utilité.  [...]

[Identification] IPG strip gel combiner a une extraction au PBS

J'aimerais savoir si vous avez un protocole me permettant d'utiliser une extraction proteique au PBS (cellule vegetal, hypocotyl de soja) suivi d'une separation utilisant la methode IPG (pour ensuite effectuer une electrophorese et un CBB staining).  [...] L'extraction classique utilise un tampon phosphate pour le broyage initial, je doute que cela soit ca du fait des lavages, ensuite les proteines sont precipites avec du TCA, laver avec de l'ethanol et remis en solution avec un tampon dont je n'ai pas la composition sous le coude (je suis en stage donc je ne connais pas encore toute les solutions exactement).  [...]

[Biochimie] Vérification Calcul dosage activité catalase

Je cherche a doser d'activité de la Catalase dans un extrait végétal, grâce à la dismutation de H 2 O 2, cependant l'enzymologie est très loin derrière moi. Je veux exprimer le résultat en U/mg de matière.   [...] Je broye 0.5g de matière fraiche dans 5ml un tampon d'extraction Phosphate, et je garde le surnageant (5ml).  [...]

[Biologie Moléculaire] Cross-linking

bjr, svp j'aimerai savoir à quoi servent le KCl et le PBS dans une réaction de cross-linking ou je regarde une interaction entre 2 protéines. sachant que les tampons de mes protéines contiennent du KCl. mon mixte comprend. les protéines, du PBS 10, le BMH( agent pontant) le KCl et H2O.  [...] Pour le Tris, c'est un tampon, mais à la différence du PBS, il n'y pas pas de sel. Donc il faut penser à en rajouter à ta manip pour ne pas dénaturer les protéines. Le tampon tris est utilisé en remplacement du PBS dans les manip ou la présence de tampon phosphate est inhibitrice (par exemple pour des kinations).  [...]

[Biochimie] Protocole de purification d'une protéine, vos avis

On introduit un volume de tampon phosphate à notre solution de protéine afin que la protéine soit chargée négativement et qu'elle adhère au support de DEAE-cellulose chargée positivement.  [...] on réalise l'élution Elution des protéines non retenues par le support avec une solution tampon phosphate (on m'a parlé de pH décroissant ).  [...]

[Biochimie] pH protéines hydrosolubles animales

Je vais tenter un fractionnement aqueux (broyage de 20 gammares dans de l'eau physiologique + du tampon phosphate 0,1M et pH7,2 ) suivit d'une centrifugation (séparation culot avec carapace, du surnageant contenant les substances hydrosolubles) et d'une lyophilisation.  [...] Cependant, je ne sais pas quel est le pH des protéines hydrosolubles présentent dans un animal. Je l'ai donc supposé être à pH7,2 car c'est le pH intracellulaire humain, d'où le tampon phosphate à ce pH.  [...]

colonne de Nickel et Tampon phosphate

mon problème est que dans ce tampon ma prot ne supporte pas la concentration avant chrommato d'exclusion, elle perd enorémént d'activité. dans la littérature j'ai trouvé que cette prot recombinante (venant d'autres organismes mais présentant un fort pourcentage d'identié avec la mienne) se concentre bien en tampon phosphate.  [...] Le tampon phosphate permet de forcer un peu le binding des proteins reticentes... En fait le binding sur Ni se fait plus facilement, mais tu te retrouves souvent avec beaucoup de non-specifique.  [...]

[Biologie Cellulaire] Fractionnement cellulaire

Tube 2. cyanure + succinate + cytochrome + tampon phosphate + fraction mitochondries.  [...] Tube 4. succinate + cytochrome + tampon phosphate + fraction mitochondries.  [...]

[Biochimie] Concentré une protéine recombinante

J' ai fait plusieures purifs d'une protéine recombinante de 7 kDa. Elle se trouve dans un tampon Imidazole 500 mM. Je voudrai maintenant la concentré et la passer dans un tampon 50 mM phosphate. Question. est il possible de faire d'une pierre, deux coups et Quels sont le méthodes éfficaces pour concentré et /ou changer le tampon d'une protéine de 7 kDa.  [...] Pour concentrer les protéines, il existe des filtres de porosité donnée (je ne sais pas s'ils descendent en-dessous de 10 kDa), qui permettent d'éliminer la quantité voulue de tampon tout en retenant la protéine. On a donc bien une augmentation de la concentration de la protéine.  [...]

[Microbiologie] tampon phosphate

Pour une solution tampon à pH 5 je te conseil plutôt un tampon acetate (mélange d'acide acitique et d'acetate de sodium) avec la même logique de mélanger les deux au pHmètre.  [...] Et il suffit d'une minute de google pour soit trouver un protocole pour préparer un tampon, soit pour se rendre compte que ça n'est pas une bonne idée. Au moins je l'aurais mis sur la voie.  [...]