• Forum - Extraction, Protéines, Succès

[Biotechnologie] Proteomics

J'ai un petit soucis avec mes gels SDS page.Mes bacteries se cultivent avec un metal lourd le chromium. Apres l'extraction de protein, j'ai des gels SDS vraiment pas beau. Les bandes ne sont pas visibles sur les gels.  [...] J'ai essaye de laver plusieurs fois le pellet avec du PBS avant l'extraction des proteines mais sans succes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Molécules chaperon

Les protéines chaperonnes sont présentes chez tous les organismes vivants, bactéries, archées et eucaryotes. Elles sont extrêmement conservées, en séquence aa et en fonction. On exprime ainsi classiquement des protéines humaines dans des cellules de drosophiles (et même souvent en bactéries pour les protéines pas trop complexes) avec un très bon taux de succès.  [...] Que se passe-t'il dans les cas où le repliement ne fonctionne pas Une protéine mal repliée est instable en solution et va précipiter. Dans la plupart des cas, ces protéines seront rapidement détruites par les protéases cellulaires, dans les quelques cas restants, la cellule va mourir si l'accumulation de ces tas de protéine nuit à son fonctionnement.  [...]

[Biochimie] Electrophorèse.

J'ai tenté une électrophorèse sur gel d'agarose pour séparer les protéines du blanc d'oeuf. Sans succès alors que sur papier buvard ça a bien marché….  [...] Une fois le gel dans la cuve à électrophorèse. faut-il le recouvrir de tampon faut il simplement utiliser du papier filtre pour assurer le contact électrique entre le tampon placé dans les deux réservoirs.   [...]

[Génétique] extraction d'ADN ancient

Bonjour, est ce que vous pourriez m'indiquer une methode pour extraire de l'ADN vieux de 20 a 50 ans conserve dans de l'alcool. une methode qui me permettrait de l'extraire avec relativement beaucoup de succes. ou des articles qui parlent d'extraction d'ADN ancien et probablement abimee.  [...] pour les procédures d'extractions je sais faire mais comme je pense que l'ADN est très abimé je voulais savoir s'il y a des méthodes afin d'extraire l'ADN de façon tres efficaces (je travail sur COI, et ARN 16s).  [...]

[Biochimie] Western blot eNOS

Je cherche depuis quelques temps a faire un western blot en utilisant un anticorps dirigée contre la serine 1179 phosphorylée de eNOS, sans succès.J'ai essaye plusieurs quantités de protéines, j'ai refait toutes mes solutions, j'ai vérifié les pH a chaque fois.  [...] Les protéines phosphrylées sont classiquement plus sensibles que les protéines non modifiées. Vous pourriez également essayer d'ajouter des inhibiteurs de phosphatases mais a priori la congélation immédiate doit résoudre le problème.  [...]

[Biologie Cellulaire] Western Blot ATM phosphorylé

J'ai déjà testé de nombreux protocoles sans succès (méthodes d'extraction différentes, migration sur petit/grand gel, transfert liquide/semi-sec..), donc j'aimerais savoir si quelqu'un possède un protocole précis ou des indications.  [...] Et, ATM est une grosse protéine, très peu abondante. Y a t-il une méthode d'extraction à privilégier de migration et de transfert.  [...]

FSH et cancers

Les succès ne sont pas vraiment à la hauteur de ce que l'on pouvait attendre d'une cible aussi prometteuse. Une des causes est la présence de mécanismes compensatoires dans la tumeur. Cela veut dire que si on inactive une cible, d'autres protéines prendront le relai pour assurer sa fonction.  [...] Activating the FSH receptor contributes to the signaling of a protein (VEGF) that stimulates the growth of blood vessels, including those in tumors. Blocking the action of the FSH receptor may also block the signaling of VEGF.  [...]

[Evolution] Comment mesurer "l'efficience darwinienne" ?

Le problème avec ça c'est que tu ne mesure pas le succès évolutif de l'espèce mais du groupe. Comme dit kinette, le seul critère de réussite évolutive d'une espèce est qu'elle survit. conclusion. toutes les espèces ayant vécu sur Terre à un instant t ont toutes été des succès évolutif, de même que toutes les espèces actuelles.  [...] Il faut donc remettre celà dans une perspective généalogique pour évaluer une forme de succés. Si l'on prends les métazoaires ( animaux ) les fossiles nous disent que certains plans d'organisation ont disparus aujourd'hui, alors que numériquement ils impliquaient un grand nombre d'espèce autrefois. Et inversément d'ailleurs.  [...]

[Biochimie] Hélices alpha des protéines transmembranaires.

Mon problème se situe à ce niveau, je n'arrive pas à trouver de proteine transmembranaire dont les helices sont fortement courbées. J'ai cherché sur la PDB mais sans reel succes jusqu'à lors.  [...] Le but est de voir la courbure des hélices alpha dans les protéines transmembranaires. On trouve, en effet, près du quart des segments hélicoidaux soit 'cassés', soit fortement incurvés.  [...]

Transfection plasmide gateway et faible expression proteique

Je veux transfecter des Hek293T, j'ai essayer différents kit d'extraction du plasmide, vérifié la sequence du vecteur et de ma protéine, verifié la concentration d'ADN, testé plusieurs concentrations... je ne sais pas quoi faire d'autre.  [...] Oui séquence de la protéine est ok dans son intégralité... On essaye en ce moment de couper et lié le bout contenant la mutation... pas vraiment un bon taux de succès mais j'espère que ça marchera.  [...]