• Forum - Extraction, Protéines, Quantité

[Biochimie] qualité protéines

Je réalise des tests de vieillissements tissulaires et regarde la dégradation au niveau ARN et Protéines.  [...] En ce qui concerne les Protéines, après extraction sur une même masse de tissus je ne vois pas de différence au niveau quantité (je m'y attendais) ni au niveau visuel (gel coloré au bleu de Comassie / bandes majoritaires). Il existe-t-il une protéine témoin de qualité à mettre en évidence en Western.  [...]

extraction des protéines par le Tris-HCl

Je suis à la recherche du rôle de la concentration du solvant Tris-HCl dans l'extraction des protéines dans le coeur de dinde (un tissu ) j'ai fait une manipulation d'extraction par le Tris-HCl 1M / 2M et 3M et j'ai trouvé les résultats suivantes.  [...] pour appuyer la réponse de vpharmaco. l'extraction de protéines est un truc relativement variable dans la quantité obtenue même avec le même tissu de départ. Avec une mesure par condition et de tels résultats on ne peut absolument rien conclure.  [...]

[Biologie Cellulaire] Extraction protéique pour western blot

Salut, voilà un petit protocole rapide pour l'extraction des protéines. Attention, vu que tu n'as pas précisé quel est le type de cellules que tu utilises, je te donne celui que j'utilise. extraction de protéines à partir de cellules de mammifères Hela (marche avec pleins d'autres types cellulaires bien évidemment).  [...] Je disais juste ça parce que je me doute que la première fois que tu as fais une extraction prot à partir d'une boite, si tu n'avais pas dosé, tu allais mettre au pif une quantité de protéines. Avec un risque de charger trop (ou pas assez) ton puits.  [...]

Méthodes d'extraction et de purification des protéines recombinées

On dit protéine recombinante. Tu auras plus de réponses sur le forum biologie. En attendant. http.//fr.wikipedia.org/wiki/Purification_de_protéines.  [...] tu as deu méthodes d'extractions. non dénaturante (qui permet de maintenir l'activité de l'enzyme), dénaturante (si tu n'as pas besoin de conserver l'activité de la protéine).  [...]

[Biologie Moléculaire] Pull down GST

Si ta production n'est pas très grande, attention toutefois à la quantité de billes nécessaire, car plus il y a de billes, plus tu augmentes la possibilité d'intéractions aspécifiques avec les billes. Ta protéine est elle soluble Car il se peut aussi qu'elle soit produite en grande quantité, mais non solubilisée dans le tampon d'extraction.  [...] La quantité nécessaire dépend de plein de paramètres, dont le poids moléculaire de la protéine d'intérêt (plus son PM est petit, moins il y a en besoin, car plus il y a de mole/µg), la force d'intéraction avec le partenaire, du type de détection (western blot, autoradiographie).  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction protéines pariétales

=. une extraction de protéines pariétales maison afin de réduire le pool protéique mais qui me donne pas assez de protéines.  [...] J'ai une ou deux idées sous le coude. partir sur des volumes d'extraction + importants et précipiter les protéines au TCA tenter un protocole d'extraction des protéines en pH alcalin.  [...]

La transgénèse arachnéène (désolé pour l'ortographe)

On ne sait synthetiser quasiment aucune proteine, elles sont toutes produites par genie genetique, dans la bacterie, les plantes, la chevre et bien d'autres organismes.  [...] C'est dans le lait et la proteine est soluble. Elle est juste produite en tres grande quantite. De nombreux traitements apres extraction permettent de re-creer la fibre.  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème quantité d'adn plasmidique après extraction

Je viens vous trouver car j'ai un petit doute quand à une extraction d'adn plasmidique. Habituellement j'utilise des kit qiagen (miniprep) et j'obtiens environ 100ng/µl de plasmide.  [...] Merci pour vos renseignements. J'ai refait une extraction en utilisant des RNases et je me retrouve avec une quantité egale à celle obtenue avec les kits.  [...]

[Biologie Moléculaire] Resolubilisation des proteines aprés extraction au trizol

Un autre problème peut être que le SDS induit quelques soucis dans les dosages de protéines par la méthode Lowry. Dans certains kits tu as un produit supplémentaire à inclure dans ta réaction si tes échantillons contiennent du SDS, je saurais pas t'en dire plus vu que j'ai toujours utilisé ce genre de kit en suivant bêtement le protocole fourni.  [...] C'est l'éternel problème des protéines, une fois précipitées elles peuvent le rester...Il existe certaines solution qui impliquent de dénaturer les protéines (urée 8M ou chlorure de guanidium 6M) pour les solubiliser. Plus rare mais parfois très efficace solubiliser dans de l'arginine 1 ou 2 M, ça peut donner des bons résultats.  [...]

extraction et dosage des protéines totales

Je voudrais savoir quelle quantité de protéine on peut s'attendre à obtenir après extraction à partir de neurones. 1µg/million de cellules 1mg/million de cellules.  [...] J'ai ensuite trouvé que 40% d'une cellule est constituée de protéines. Mais bon il me manque encore le poids d'une cellule et le rendement d'un extraction... hin hin... je sais pas si c'est la bonne direction pour répondre à ma question.  [...]