• Forum - Extraction, Protéine, Coeur

[Biologie Cellulaire] Extraction de protéine du coeur

Je cherche un protocole pour l'extraction des protéines à partir d'un coeur de rat. Ainsi que quelques détails sur le dosage BCA de Pierce.Merci.  [...] Pour l'extraction, le protocole sera très différent selon que tu souhaites extraire toutes les protéines ou une catégorie seulement... il faudrait plus de précisions.  [...]

[Biochimie] Extraction protéine cry du bacillus thuringiensis

J'ai une présentation à réaliser sur l'extraction de la protéine cry (insecticide) du bacillus thuringiensis. Uniquement l'extraction et non la culture et la purification. Le problème est qu'il existe énormément de méthodes liées à l'extraction de cette protéine, et je m'y perd donc un peu.  [...] La méthode que je choisirais pour une telle isolation serait une destruction physique (Homogénéisateur de type Dounce, presse Aminco- French...) suivie d'une sédimentation pour séparer les composants. Ces méthodes conviennent-elles à mon problème De plus, avez vous une idée du tampon à utiliser pour réaliser cette extraction (SDS ).  [...]

IMPORTANT : extraction cytochrome c

Bonjour à tous, nous sommes dans une manip d'extraction de cytochrome c d'un coeur de boeuf. Nous avons déjà nettoyé la solution du reste des protéines à l'aide de sulfate ammonique. Nous avons atteind un pH de 7 d'où nous n'avons pas tocuhé au cytochrome c.  [...] Après centrifugation, nous avons acidifié le surnageantà pH 3.4 à l'aide de TCA. En effet, le cytochrome c oxydé est moins solublé dans le sulfate ammonique et devrait précipiter sous forme de flocons rouges.   [...]

extraction des protéines par le Tris-HCl

Je suis à la recherche du rôle de la concentration du solvant Tris-HCl dans l'extraction des protéines dans le coeur de dinde (un tissu ) j'ai fait une manipulation d'extraction par le Tris-HCl 1M / 2M et 3M et j'ai trouvé les résultats suivantes.  [...] pour appuyer la réponse de vpharmaco. l'extraction de protéines est un truc relativement variable dans la quantité obtenue même avec le même tissu de départ. Avec une mesure par condition et de tels résultats on ne peut absolument rien conclure.  [...]

[Biochimie] extraction protéine d'une huile ou d'une cire pour quantification

l'huile étant insoluble dans l'eau il m'est impossible de solubiliser le peu de protéines présents, (je tiens à préciser que le dosage est réalisé sur des quantités exprimées en ng de protéines/mg d'échantillon) donc j'ai très peu de matière.  [...] Cela ma permis d'obtenir des début de résultat mais, mon extraction témoin ne ma permit de récuperer que 40% de mon ajout protéique.  [...]

[Biochimie] Extraction proteine nucleaire nematode

Si c'est un facteur de transcription tu as différentes solution, soit tu fais un ChIP mais il te faut un anticorps contre ta protéine d'intérêt.  [...] Sinon tu peux taggé ta proteine mais ca va te prendre du temps, si tu as la séquence tu fais un histidine tag ou une fusion avec la gst et tu isole sur colonne d'affinité. Mais pour ca va falloir faire des constructions, les microinjecter, et avoir des vers transgéniques.  [...]

[Biochimie] Extraction d'une protéine nucléaire pour WB

J'ai d'abord commencer à faire une extraction au SDS (plus cocktail d'inihibiteur), j'ai aussi essayé tampon d'extraction classique (Triton, Glycerol, NaCl, EDTA, anti protéases). Apres dosage et dilution dans lameli, j'ai fait un WB (migration sur gel 10% SDS.  [...] Le probleme c'est que ma protéine est pas très exprimé et les anticorps ne sont pas de très bonne qualité (et les tampons d'extraction pas forcement les meilleurs), au final j'ai beaucoup de non spécifique, pas beaucoup de signal au niveau de ma bande.  [...]

[Biochimie] chaine polypeptidique

Dans une électrophorèse, c'est un peu compliqué, il faut être en condition dénaturante (avec du SDS par exemple) et utiliser du beta-mercaptoéthanol qui est un agent réducteur des ponts dissulfure. Cela va permettre de complètement dissocié la protéine. Cependant, selon ce que vous connaissez, il y a plusieurs démarches.  [...] La cristallographie reste le meilleur moyen de retrouver la structure fine de ta protéine mais la préparation d'échantillon est complexe et non garantie (extraction non dénaturante, cristallisation de la protéine, etc..).  [...]

[Biochimie] Extraction protéine de cerveau pour IP

je souhaiterai faire une IP d'une protéine en fusion avec MBP et des extraits protéiques de cerveau de souris.  [...] Je souhaiterai savoir si vous auriez un protocole d'extraction de protéines à partir de cerveau.  [...]

[Biochimie] élution protéine

En TP, j'ai utilisé une colonne séphadex G100 pour purifier une phénoloxydase végétale. La courbe d'élution (concentration protéine fraction = f(volume élution))présente un premier gros pic (je pense qu'il représente les grosses molécules) puis un deuxième pic plus petit (qui représente les molécules de plus petites tailles).  [...] - Le pic contaminant est celui qui sort le plus tôt. agrégat de ta protéine dû à sa dénaturation, aux conditions d'extraction,  [...]