• Forum - Extraction, Précipitation, Acides

[Biologie Moléculaire] Biotinylation et colonnes

Pensez-vous qu'il est possible de simplifier ces étapes de purification Par exemple faire directement un gel à la sortie de la PCR (ma bande est à 800bp).   [...] Pensez-vous que le fait que mes amplicons soient biotinylés empêche l'utilisation de kits de purification d'ADN (par exemple le NucleoSpin Extract II).  [...]

[Microbiologie] Test de Lancefield

Voilà j'ai un petit trou et j'ai perdu mes cours à ce sujet. Je ne me rappelle plus comment on réalise le test de Lancefield pour le sérogroupage des streptocoques.   [...] =. par la technique de Lancefield qui comprend une extraction du polyoside C à partir d'une suspension de la souche par l'acide chlorhydrique à chaud ou par l'acide nitreux ou par le formamide ou encore par la pronase suivie d'une réaction de précipitation en tube en présence des antisérums spécifiques.  [...]

[Biochimie] Améliorer la quantité, qualité et pureté d'une extraction d'ARN

J'ai effectué une extraction d'ARN à partir des cellules THP-1 humaines par deux techniques différentes. la technique d'extraction par précipitation en utilisant le trizol et la technique par extraction par colonne utilisant le kit direct-zol ARN miniprep et des colonnes appel zymo-Spin IIC.  [...] D'autre part, j'ai mesuré la qualité de l'extraction en mesurant le ration 28S/18S pour chaque méthode utilisé. Pour l'échantillon de précipitation le ratio est 1,39. Pour l'échantillon colonne le ratio est de 1,28. Je remarque qu'il y aune plus grande dégradation dans les échantillons où la méthode par colonne a été fait contrairement aux échantillons fait par la méthode par précipitation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Solution Q du kit Qiagen

A tout hasard est ce que tu utilises le Kit Rneasy Mini pour l'extraction de l'ARN, pourrais tu m'expliquer quel est le principe Merci d'avance.  [...] effectivement Marie_Eve a raison. il ne faut pas oublier la précipitation des acides nucléiques avec de l'alcool (à 70 % je crois). Mea Culpa.  [...]

[Biochimie] TPE sur l'ADN

- l'extraction totale d'ADN. C'est celle que l'on effectue, par exemple, sur des prélèvements de sang ou des cellules de l'épithélium buccal).  [...] Je rajoute une petite précision sur ces extractions. elles sont souvent réalisées à partir de traces et ont donc un plus faible rendement. En cause. la faible quantité d'ADN et une plus ou moins bonne qualité (dégradation, mélanges, inhibiteurs de PCR, etc).  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification infructueuse

Idée un peu simple pour tester l'extraction. hydrolyse complète, puis voir au chlorure d'argent si on aurait une précipitation Ag 3 PO 4.  [...] Les petits polyphénols peuvent peut-être dénaturer les enzymes (). Mais en principe ils devraient rester dans la phase organique de l'extraction... Pour les polysaccharides, certains peuvent peut-être agir comme inhibiteurs compétifis (). Cependant en concentrant l'ADN par précipitation, j'imagine qu'on élimine pas mal de ces polymères osidiques avec l'éluant.  [...]

[Biologie Moléculaire] Précaution pour etude méthylation ADN

je vais devoir faire une étude de la méthylation d'une region, surement par traitement bisulfite et sequencage et j'aurais aimé savoir s'il y avait des précautions à prendre pour la préparation des ADN.   [...] Merci pour vos réponses, c'est ce que je fais tout le temps avec mes ADN donc çà devrait aller. Je pensais qu'il y avait peut être des techniques d'extraction, ou de précipitation particulière.  [...]

[Biologie Moléculaire] protocole extraction ARN (pas de kit, ni trizol)

Essaye un protocole d'extraction d'ADN classique, lyse avec un détergeant, puis précipitation a l'alcool. Si tu manipules proprement alors tu auras de l'ADN et de l'ARN.  [...] Dans le molecular cloning, il y a un protocole pour des extractions d'ARN a base de thiocyanate de guanidine et phénol. Un genre de trizol maison quoi.  [...]

[Identification] Trypsinisation avant 2D-LC-MS/MS : CaCl2 ?

Dans mon protocole de trypsinisation de solution, j'utilise du PPS (pour ses propriétés détergentes compatibles MS/MS) et CaCl2 (1mM). Mais je ne comprend pas pourquoi j'utilise du CaCl2.   [...] Ps. Je travaille sur des cellules d'Arabidopsis thaliana, j'ai fait l'extraction protéique par précipitation au TCA (j'ai utilisé de l'urée comme détergent). Après ma trypsinisation, je fais du 2D-LC-MS/MS.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme de ligase?

2/ Je n'aime pas trop que les deux partenaires d'une ligation soient extraits d'un gel, ça diminue pas mal l'efficacité de ligation. Il vaut mieux purifier uniquement le fragment sur gel et traiter le vecteur à la phosphatase (+ extraction phénol après, of course).  [...] S'il reste la moindre trace de phosphatase pendant la réaction de ligation, ça va déphosphoryler aussi ton fragment et rendre la ligation impossible. Dernier point. l'extraction au phénol est toujours suivie d'une précipitation à l'éthanol, mais je suppose que tu le savais déjà.  [...]