• Forum - Extraction, Phase, Organique

extraction d'ADN

L'extraction phenol/chlorophorme permet en general de separer la phase acqueuse (ou se concentrent les acides nucleiques) et la phase organique (dans la quelle les proteines se solubilisent plus facilement que les acides nucleiques apres avoir ete denaturees par le phenol).  [...] Le phénol suffirait à liberer l'ADN Il faudrait peut être broyer comme pour le trizol. Mais dans ce cas, si il faut pistonner toutes les biopsies bonjours le boulot quand y en a une centaine... Deja que l'extraction prend du temps quand y en a une masse.  [...]

Expériences en génétique…

sur ce lien, il ya a un protocole d'extraction d'ADDN d'onion que l'on peut faire avec dans sa cuisine sans equipement complique, l'auteur propose d'autres protocoles simples dans le menu.  [...] Pour l'extraction d'ADN. quelques conseils. L'oignon c'est bien, mais ça sent fort. Je l'ai fait, et mes mains ont senti l'oignon pendant 3 jours... Ça marche très bien aussi avec la tomate ou le kiwi. En plus on voit mieux la différence entre la phase acqueuse rouge ou verte et la phase organique incolore.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème génotypage souris mutées

- pour l'étape d'extraction au phénol/chloroforme, je vais essayer mais avec du Trizol (car je n'ai pas de phénol) en adaptant le protocole car dans ce cas l'ADN est dans la phase organique.  [...] Je soupçonne ma méthode d'extraction car l'échantillon avec lequel j'ai retrouvé la 2ème bande n'a pas été extrait de la même façon que ceux que j'ai analysé ensuite (robot Qiagen vs tampon maison + PK), même si ça n'explique pas pourquoi j'avais perdu cette bande pour cet échantillon (dégradation ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification infructueuse

j'ai réussi a le convaincre d'acheter des primers contrôles, mais il ne les commandera pas avant lundi, ce qui veut dire que je les aurai sûrement mercredi, et dans le doute ou le problème viendrait pas de mes primers dégénérés et que les primers contrôles n'amplifient rien non plus, je vois pas comment distinguer si c'est l'extraction qu'a foiré (malgré que les résultats nanodrop soient corrects) ou si le problème vient du protocole PCR.  [...] Les petits polyphénols peuvent peut-être dénaturer les enzymes (). Mais en principe ils devraient rester dans la phase organique de l'extraction... Pour les polysaccharides, certains peuvent peut-être agir comme inhibiteurs compétifis (). Cependant en concentrant l'ADN par précipitation, j'imagine qu'on élimine pas mal de ces polymères osidiques avec l'éluant.  [...]

Solubilite des phospholipides

6. Centrifuger 15 minutes, 500 g. Récupérer la phase organique. Réextraction sur la phase aqueuse des lipides restant avec une solution Chloroforme/méthanol/NaCl (86/14/1, v/v/v).  [...] Attention, ce protocole marche très bien pour les tissus animaux, mais je ne l'ai jamais testé sur du tissu végétal. Ceci dit, contrairement à une extraction protéique, tu ne devrais pas te retrouver avec la paroi sur les bras, puisque ce qui t'intéresse est la phase organique.  [...]

[Biologie Cellulaire] protéines dans la phase organique?

je n'ai jamais vu de proteines aller dans la phase organique... mais en revanche il peut se produire parfois une inversion de phase (la phase organique passe au dessus).  [...] Classiquement, on dit que les protéines vont au niveau de l'interphase, entre le solvant et la phase acqueuse.  [...]

[Biochimie] Les lipides

Ton truc la c'est juste un mélange de deux phases. une phase organique (huile) et une phase aqueuse (eau).  [...] eau+huile+noir soudan+ détergeant. le détergent crée des micelles qui permettent une émulsion d'huile dans l'eau, les lipide noires doivent apparaitre gris et bien homogènes dans la solution... On n'a plus deux phases mais une seule et les lipides en solution sous forme de micelles.  [...]

[Biochimie] Problème Extraction ARN totaux méthode Trizol-Chloroforme

200ng/µL, c'est une concentration qui peut être normale, ça n'est pas aberrant. En surnageant, tu récupères combien j'imagine que ça tourne autour des 500µL. Par contre, l'ajout de chloroforme se fait avant toute centrifugation puisqu'il participe à la formation des différentes phases.  [...] -vortexer 30'' (pas moins, c'est l'étape la plus importante, celle ou tu récuperes les acides nucléiques dans la phase aqueuse, et le reste dans la phase organique).  [...]

[Biologie végétale] Photosynthèse

- phase non photochimmique. mais que faut-il pour réaliser la synthèse de matière organique à partir du CO2.  [...] L'hypothèse est la suivante. ce qui est produit lors de la phase photochimique est utilisé dans la phase non photochimique.  [...]

[Biologie Moléculaire] biologie moléculaire

Tu lyse tes cellules avec un réactif acide contenant de l'isothyocyanate de guanidium et du phénol. On fait une séparation par centrifugation avec du chloroforme ou du bromochloropropane. Tu obtiens une phase aqueuse (ARN), une interface et une phase organique.  [...] On prélève l'ARN puis une précipitation à l'isopropanol, puis centrifugation. On a l'ARN qui précipite, on lave le culot et on solubilise l'ARN dans du formamide désionisé.   [...]