• Forum - Extraction, Phase, Organique

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

Pour l'extraction des ARNs, le P/C/IAA doit être à pH acide (~5), ce qui va dénaturer l'ADN pour se retrouver dans la phase organique et pour ne trouver que les ARN dans la phase aqueuse.  [...] Autre chose, l'ARN est très fragile et facilement dégradable. Donc, cela ne gène pas la manipulation, il y à relativement peu d'ARN, même si on peut en obtenir pas mal quand on le désire mais avec cette méthode, on ne favorise pas l'ARN. Mais encore une fois tout dépend, à mon avis, du but de l'extraction.  [...]

extraction d'ADN

L'extraction phenol/chlorophorme permet en general de separer la phase acqueuse (ou se concentrent les acides nucleiques) et la phase organique (dans la quelle les proteines se solubilisent plus facilement que les acides nucleiques apres avoir ete denaturees par le phenol).  [...] Le phénol suffirait à liberer l'ADN Il faudrait peut être broyer comme pour le trizol. Mais dans ce cas, si il faut pistonner toutes les biopsies bonjours le boulot quand y en a une centaine... Deja que l'extraction prend du temps quand y en a une masse.  [...]

Expériences en génétique…

sur ce lien, il ya a un protocole d'extraction d'ADDN d'onion que l'on peut faire avec dans sa cuisine sans equipement complique, l'auteur propose d'autres protocoles simples dans le menu.  [...] Pour l'extraction d'ADN. quelques conseils. L'oignon c'est bien, mais ça sent fort. Je l'ai fait, et mes mains ont senti l'oignon pendant 3 jours... Ça marche très bien aussi avec la tomate ou le kiwi. En plus on voit mieux la différence entre la phase acqueuse rouge ou verte et la phase organique incolore.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème génotypage souris mutées

- pour l'étape d'extraction au phénol/chloroforme, je vais essayer mais avec du Trizol (car je n'ai pas de phénol) en adaptant le protocole car dans ce cas l'ADN est dans la phase organique.  [...] Je soupçonne ma méthode d'extraction car l'échantillon avec lequel j'ai retrouvé la 2ème bande n'a pas été extrait de la même façon que ceux que j'ai analysé ensuite (robot Qiagen vs tampon maison + PK), même si ça n'explique pas pourquoi j'avais perdu cette bande pour cet échantillon (dégradation ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification infructueuse

j'ai réussi a le convaincre d'acheter des primers contrôles, mais il ne les commandera pas avant lundi, ce qui veut dire que je les aurai sûrement mercredi, et dans le doute ou le problème viendrait pas de mes primers dégénérés et que les primers contrôles n'amplifient rien non plus, je vois pas comment distinguer si c'est l'extraction qu'a foiré (malgré que les résultats nanodrop soient corrects) ou si le problème vient du protocole PCR.  [...] Les petits polyphénols peuvent peut-être dénaturer les enzymes (). Mais en principe ils devraient rester dans la phase organique de l'extraction... Pour les polysaccharides, certains peuvent peut-être agir comme inhibiteurs compétifis (). Cependant en concentrant l'ADN par précipitation, j'imagine qu'on élimine pas mal de ces polymères osidiques avec l'éluant.  [...]

Solubilite des phospholipides

6. Centrifuger 15 minutes, 500 g. Récupérer la phase organique. Réextraction sur la phase aqueuse des lipides restant avec une solution Chloroforme/méthanol/NaCl (86/14/1, v/v/v).  [...] Attention, ce protocole marche très bien pour les tissus animaux, mais je ne l'ai jamais testé sur du tissu végétal. Ceci dit, contrairement à une extraction protéique, tu ne devrais pas te retrouver avec la paroi sur les bras, puisque ce qui t'intéresse est la phase organique.  [...]

[Biologie Cellulaire] protéines dans la phase organique?

Moi j'ai fait une extraction éthanol/chloroforme sur un broya de foie et les protéines étaient bien dans la phase supérieur aqueuse.  [...] je n'ai jamais vu de proteines aller dans la phase organique... mais en revanche il peut se produire parfois une inversion de phase (la phase organique passe au dessus).  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ARN

J'ai dû mal m'exprimer, je sais que le trizol ne permet pas de les séparer, mais qu'il lyse seulement les cellules. Au labo dans lequel je suis on m'a pourtant expliqué que le colorant présent dans le trizol était soluble dans les solvant organique, ce qui fait qu'il se retrouve en bas (puisque visuellement j'ai bien une phase organique rose), que l'anneau du milieu représentait l'ADN, et la phase aqueuse en haut regroupait les ARN.  [...] La phase organique est en bas contient les protéines et les débris, l'anneau blanc à l'interphase ce sont encore des protéines et des lipides, et dans la phase acqueuse il y a TOUS les acides nucléiques.  [...]

[Biochimie] Les lipides

Bah moi je n'est pas de solide c'est que des liquide.s et j'ai a peut prés les même definition que tu m'a donner mais par exemple dans le cas ou j'ai de l'huile et de l'eau quand je melange sa fait une solution blanche et aprés avoir laisser reposer j'ai une couche transparente en bah et une couche opaque en haut donc l'huile et au dessus et l'eau en dessous nan donc je ne vois pas lequel des mot irai pour cela.s.   [...] eau+huile+noir soudan+ détergeant. le détergent crée des micelles qui permettent une émulsion d'huile dans l'eau, les lipide noires doivent apparaitre gris et bien homogènes dans la solution... On n'a plus deux phases mais une seule et les lipides en solution sous forme de micelles.  [...]

[Biochimie] Problème Extraction ARN totaux méthode Trizol-Chloroforme

200ng/µL, c'est une concentration qui peut être normale, ça n'est pas aberrant. En surnageant, tu récupères combien j'imagine que ça tourne autour des 500µL. Par contre, l'ajout de chloroforme se fait avant toute centrifugation puisqu'il participe à la formation des différentes phases.  [...] -vortexer 30'' (pas moins, c'est l'étape la plus importante, celle ou tu récuperes les acides nucléiques dans la phase aqueuse, et le reste dans la phase organique).  [...]