• Forum - Extraction, Dosage, Protéines

[Biochimie] extraction et dosage de proteines (leucocytes)

SVP 1) je veux savoir la composition de la solution de lyse pour extraire les proteines à partir de leucocytes.  [...] j'ai doser les proteines par la methode de bradford mais j'ai trouvé des valeurs négatives.  [...]

[Biochimie] Dosage de protéines par Bradford

J'ai effectué le dosage de protéine du lait. Pour l'extraction des protéines, j'ai peser 4g de l'échantillon et ajouter 20 mL de méthanol. Après centrifugation le volume extrait de surnageant est de 21 mL avec une absorbance de 0.050 nm. La courbe d'étalonnage du BSA en fonction de l'absorbance est. y= 0.0078x.  [...] Non, je répète. vous aviez 4 g d'échantillon dans vos 21 mL, au final vous avez 6.4 µg protéine BSA dans 100µL qui représente 0,019 g donc.  [...]

[Biologie Cellulaire] Extraction de protéine du coeur

Je cherche un protocole pour l'extraction des protéines à partir d'un coeur de rat. Ainsi que quelques détails sur le dosage BCA de Pierce.Merci.  [...] Pour l'extraction, le protocole sera très différent selon que tu souhaites extraire toutes les protéines ou une catégorie seulement... il faudrait plus de précisions.  [...]

[Identification] IPG strip gel combiner a une extraction au PBS

L'extraction classique utilise un tampon phosphate pour le broyage initial, je doute que cela soit ca du fait des lavages, ensuite les proteines sont precipites avec du TCA, laver avec de l'ethanol et remis en solution avec un tampon dont je n'ai pas la composition sous le coude (je suis en stage donc je ne connais pas encore toute les solutions exactement).  [...] question bête mais vous êtes-vous assuré que l'extraction avait bien marché Avez-vous fait un dosage et déposé suffisamment de protéines pour l'IPG.  [...]

[Biochimie] purif ARN

ça va etre tres rapide, j'ai fais l'extraction d'ARN totaux et lors du dosage via le rapport 260/280, j'obtiens une valeur de 2,98... Valeur bcp trop élevé qui montre une contamination. Mais cette contamination n'est pas proteique.  [...] En effet, nous avons utilisé le phenol/chloro pour l'élimination des proteines lors de l'extraction de l'ARN total.  [...]

[Biologie Cellulaire] etude du niveau de phosphorylation d'une protéine en WB

Pour l'extraction, si tu veux conserver les phosphorylations de ta protéine, il faut de l'orthovanadate de sodium (inhibiteur de phosphatase) dans le tampon et éventuellement d'autres inhibiteurs. Mais surtout garder les échantillons dans la glace le plus possible une fois l'extraction faite, cela limite d'autant plus les déphosphorylations.  [...] je vais essayer une technique d'extraction avec des inhibiteurs, j'ai trouvé un protocole qui me semble adapté, et j'effectuerai un dosage avant de déposer.  [...]

[Biologie Moléculaire] Resolubilisation des proteines aprés extraction au trizol

Je suis en stage pour le M1. On travaille sur l'hypophyse de rat et on a fait une technique d'extractin d'ARN et de proteines au trizol. Ensuite les proteines sont mises dans du SDS et stockés à moins 20°C. Sauf que quand on a fait un dosage proteique par la methode de lowry d'où on a obtenu des quantités trés faibles de proteine.  [...] $récupérer les protéines apres extraction aux solvants organiques n'est pas le mieux. Je sais que l'hypophyse n'est pas énorme, mais l'idéal est d'extraire les ARN et protéines séparément.  [...]

[Biochimie] Dosage spectrophotométrique des protéines

Il y a le nanodrop pour doser les protéines. Dans le principe, cela reste de la spectrophotométrie puisqu'on dose l'absorbance d'une goutte d'échantillon déposée sur une lentille qui émet un faisceau de lumière à 280 nm. L'avantage est qu'il n'y a pas besoin de cuve en quartz pour le dosage (à la différence des spectrophotomètres classiques pour le dosage de protéines sans coloration), il n'y a pas besoin de coloration, et surtout très peu de matériel biologique est utilisé pour le dosage puisque le volume de la goutte déposée pour le dosage est de l'ordre de 1 à 3 µl.  [...] Vous avez aussi le dosage par Warburg et Christian. Il permet la séparation des acides nucléiques et protéines selon un ratio propre à la méthode.  [...]

[Biochimie] Dosage des protéines totales méthode de Bradford.

Tu lit l'absorbance de ta gamme étalon et trace ta courbe tu auras un courbe de l'absorbance en fonction de la quantité de protéine présente dans tes tubes.  [...] j'ai une question à vous poser, lors de la préparation de la gamme étalon SBA est ce qu'on utilise pour la dilution l'eau distillée ou le tampon avec lequel on a fait l'extraction des protéines.  [...]

[Biochimie] Extraction et dosage des protéines

Ensuit je transfert le tout dans du Ripa et j'extrait les protéines. Je me retrouve encore avec plus ou moins de cellules sanguines dans ma solutions dues à la lyse. Je n'ose pas l'éliminer car se trouvent également mes protéines d'intêret. Ceci affecte mon dosage (méthode de Bradford).  [...] Je suis obligée de beaucoup diluer pour éviter ce dosage parasitesui de plus et inégal selon mes échantillons. En fait quand je colore au bleu de coomassie un gel contenant mes protéines après électrophorèse, je m'aperçois que je ne retombe pas sur mon dosage (certains profils protéiques sont plus intenses alors que moins concentrés que d'autres lors du dosage).  [...]