• Forum - Extraction, ARN, Total

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN total sur fourmi unique

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN total sur fourmi unique.  [...] je cherche à extraire l'ARN total à partir d'une fourmi unique, dont je dois tirer 4-5 µg. J'utilise la méthode Trizol-chloroforme, mais j'ai toujours un problème de pureté, spécifique à la fourmi. J'ai un pic d'absorbance à 220-230 nm, dont je n'arrive pas à me débarrasser.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR quantitative

Dans mon cas, j'utilise des dilutions au 10e, 30e et 90e. Ce qui revient à faire les quantif sur environ 50, 17 et 5 ng d'ARN totaux. Et là, en tenant compte de la dilution bien sur, j'obtiens 3 fois le même nombre de copies.  [...] Ceci dit j'arrivais à détecter des expressions très faibles avec mes PCR de 40 cycles (sur GeneAmp 5700). La plus faible a été 23 copies/ng ARN total.  [...]

[Biologie Moléculaire] Que devient l'ARNr dans une reaction de RT

Voila, nous avons effectué ensemble une extraction d'ARN total (à partir d'embryon de zebrafish) en utilisant un Kit (avectraitement à la DNAse). Pour vérifier la qualité des nos ARN nous en déposons 1µl sur une puce ARN Nano bioanalyser agilent. Nous y avons vu nos deux beaux pics d'ARNr 18 et 28S avec un RIN de 10.  [...] Effectivement, je n'ai pas utilisé de RNAse, ma transcriptase reverse a une petite activité RNase H (élimine les ARN des Hybrides ARN.ADN), j'utilise des oligo DT pour que ma RT soit spécifique des ARNm...alors dans mon tube de RT j'ai de l'ARN total, donc quand je depose moin cDNA sur puce, j'ai de L'ARNt, l'ARNr l'ARNm et du cDNA...alors ou sont passés mes ARNr.  [...]

[Biochimie] purif ARN

ça va etre tres rapide, j'ai fais l'extraction d'ARN totaux et lors du dosage via le rapport 260/280, j'obtiens une valeur de 2,98... Valeur bcp trop élevé qui montre une contamination. Mais cette contamination n'est pas proteique.  [...] En effet, nous avons utilisé le phenol/chloro pour l'élimination des proteines lors de l'extraction de l'ARN total.  [...]

[Biologie Moléculaire] EXTRACTION ARNt

Bonsoir, je viens de me lancer dans des expériences d'extraction d'ARNt à partir du sang total.dans ma première extraction j'ai obtenu un randement de 2,1 (DO260=0,069) avec une concentration de 69ug/ml qui me parrait faible. dans l'étape de rétrotranscription selon le protocol je dois prendre 1ug/ul d'ARN alors que mon échantillon a une concentration faible(0,069ug/ul), je ne sais pas quoi faire dans ce cas, est-ce que je peux doubler de volume pour régler ce probleme.  [...] une autre question me préoccupe, la valeur de 69 est la concentration, alors comment déterminer la quantité de mon ARNt.   [...]

[Biologie Moléculaire] conservation sang total et ARNs

[Biologie Moléculaire] conservation sang total et ARNs.  [...] J'aimerai demander si la conservation du sang total à -4 ou -20C affecterait les ARNs circulants et le rendement de l'extraction de ces derniers et si vous pouvez m'indiquer la période et la température optimale de stockage/conservation des prélèvements sanguins qui permet de préserver les ARN.  [...]

Calcul de ratios en real time RTqPCR: Combinaison de gènes de référence.

J'étudie le niveau d'expression d'un gène A, j'ai à ma disposition 40 échantillons (d'ARN total issu d'extraction). Je ne peux passer que 10 échantillons par série sur les machines de RT qPCR. Je dois donc les passer en 4 fois. Pour homogénéiser les differentes séries, je dispose d'un échantillon calibrateur que j'utilise à chaque série de RTqPCR.  [...] Je me suis rendu compte que le niveau d'expression en ARN de GAPDH n'est pas stable d'un échantillon à l'autre, j'ai ajouté deux autres gènes de référence (ESD et PLOR2A).  [...]

[Biochimie] Problème Extraction ARN totaux méthode Trizol-Chloroforme

[Biochimie] Problème Extraction ARN totaux méthode Trizol-Chloroforme.  [...] Problème Extraction ARN totaux méthode Trizol-Chloroforme.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ARN

en fait j'ai pas rajouté un lavage au chloroforme. moi je travail avec un kit d'extraction de PROMEGA (RNAgents Total RNA Isolation System) et je pense qu'il faut éviter de trop manipuler l'ARN car il risque de se degrader surtout si on travail dans des conditions qui ne sont pas vraiment adapté à ce type de manipe et c'est mon cas.  [...] J'ai juste remarqué qu'en travaillant sur des échantillons congelés dans le TRIzol, j'avais un meilleur rendement que si je les traitais de suite après le prélèvement. Le fait de chauffer les échantillons pour favoriser la dissolution des sels avant extraction augmenterai mon extraction d'ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction des ARN par la méthode phénol/chloroforme

j'aurais une petite question au sujet de l'extraction des ARN totaux par la méthode au phénol chloroforme.  [...] J'ai fait pas mal d'extraction d'ARN par cette méthode et je n'utilisais pas ces sels.  [...]