• Forum - Extraction, ARN, Dosage, Rapport

[Biochimie] purif ARN

ça va etre tres rapide, j'ai fais l'extraction d'ARN totaux et lors du dosage via le rapport 260/280, j'obtiens une valeur de 2,98... Valeur bcp trop élevé qui montre une contamination. Mais cette contamination n'est pas proteique.  [...] En effet, nous avons utilisé le phenol/chloro pour l'élimination des proteines lors de l'extraction de l'ARN total.  [...]

Problème avec mes dosages d'ARN

J'ai un petit problème avec mon dosage d'ARN. le rapport de DO 260nm/280nm est supérieur à 2 je vois pas trop ce que ça signifie et de quelle contamination il s'agit, d'autant plus que quand je recommence le dosage un autre jour, c'est encore pire.  [...] En fait, je passe une fois mon échantillon dilué dans de l'eau au spectro et ça me donne les DO à 260 et 280 ainsi que le rapport pour l'avoir dans les mêmes conditions que le dosage des ARN proprement dit.  [...]

[Biologie Moléculaire] Q-CPCR encore !

Je me pose la question, je souhaite comparer l'expression du gène A dans deux tissus (tissu 1 et tissu 2). Il se trouve qu'après extraction je me retrouve après plusieurs manips et une moyenne, une quantité d'ARN totaux dans le tissu 1 10 fois plus importante que dans l'autre.  [...] Au fait quand tu fais ton extraction, ce sont des ARN totaux ou des ARNm spécifiquement Si effectivement tes cellules expriment des quantités différentes d'ARN, faudrait voir la part des messagers par rapports aux autres, pour voir lors de ton dosage par spectro si des différences d'expression des ARNm influent bcp sur la quantité calculée.  [...]

Dégradation des ARNs DNAsés ?

Sinon, ce que tu peux éventuellement faire, c'est un dosage de ta quantité d'ARN après extraction histoire de voir un peu la différence. Deja, tu devrais pouvoir voir si le problème vient d'ici.  [...] Est il possible pour toi de faire une extraction de tes ARN via un kit Qiagen Il n'utilise pas le Trizol et est peut etre moins dégradant. Pour info, je fais mes extractions en kit Qiagen et je passe par l'étape facultative de DNaseI. Je n'ai jamais eu de problèmes personnellement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN

j'ai fait une extraction d'ARN au trizol qui a plutôt bien fonctionnée. J'ai fait un dosage afin de vérifier les concentrations et un gel afin de vérifier les contaminations. Tout était nikel. J'ai ensuite fait un traitement DNAse avec un kit turbo DNAse, fait mes dosages et de nouveau un gel qui paraissaient bons.  [...] Afin de vérifier la présence d'ADN, j'ai fait une PCR avec des primers beta-tubuline. Et là, j'ai eu d'une part des fragments de beta tubuline amplifié dans tous mes échantillons mais d'autre par des fragments bizarres un peu partout sauf dans mon témoin positif.   [...]

[Biologie végétale] la mobilisation des réserves protéiques

bonjour je suis chercheuse en biophysiologie végétale..jai fais des études sur des graines de petit pois et plus précisément jétudie la mobilisation des réserves protéiques (les fractions majeures. les albumines et les globulines) mais jai trouvé après extraction et dosage que la quantité des globulines est très faible par rapport à celle des albumines (normalement les globulines sont les majeures).  [...] .jne sais pas si le problème vient du protocole d'extraction( parce que jutilise le 2mercaptoethanol) ou il y a une explication plus scientifique..jattends avec impatience vos réponses..merci )).  [...]

Intransmissibilité du VIH sous traitement ?

Je ne pense qu'il soit utile pour vous d'étaler un argumentaire qui est construit très exactement selon les artifices de ceux qui ont voulu invalider l'usage du préservatif. il n'est pas fiable à 100%, il n'est pas toujours mis etc...les rapports avec préservatif n'étant pas sûr à 100%, c'est un crime de ne pas dire sa séropositivité dans un rapport anonyme.  [...] - Il ne faut pas oublier non plus que le dosage de l'ARN viral peut être (rarement) faux (sans rapport avec ce qu'il est vraiment), c'est ce qu'on appelle en statistique un écart à la moyenne. C'est très rare mais quand on suspend une vie à un résultat (en l'occurrence pas la sienne mais celle d'un partenaire de hasard ou régulier), celui-ci demande à être confirmé.  [...]

Extraction ARN totaux

Pour extraire les ARN totaux d'une culture cellulaire ou bien de tissu j'utilise la méthode classique phénol-guanidine isothiocyanate-chloroforme. J'obtiens des ARN de bonne qualité or lors du dosage spectrophotométrique j'ai une absorption assez importante à 230nm qui est légèrement inférieur voire identique à l'absorbance à 260nm.  [...] Personellement, j'utilise les kit QIAGEN pour effectuer mes extractions. Cette méthode consiste à capturer les ARN totaux sur une colonne et de la nettoyer par la suite. La dernière étape consiste à récupérer les ARN dans de l'eau RNase free. Tu peux effectuer ton dosage par la suite sans soucis.  [...]

[Biochimie] Analyse de l'expression du gène fos

Votre image est très petite et un peu inexploitable en l'état. Il sera difficile de vous aider avec ce document. Pourriez vous en produire une version plus grande (et éventuellement la charger sur le serveur futura-sciences via la fonction gérer les pièces jointes qui se trouve en bas de la case dans laquelle on rédige les messages.).   [...] Le couplage UTP-dig (dig pour digoxine) est un classique pour marquer de manière non radioactive les sondes. La synthèse des sondes se fait par transcription (de plasmides en général) ou par PCR et l'UTP marqué est incorporé dans dans le transcrit/amplicon comme un UTP ou un TTP.   [...]

[Biologie Moléculaire] Dosage des ARN à l'orcinol

Or, j'ai lu sur des sites anglais que la réaction de Bial en milieu acide ne libérait que les pentoses liés aux purines, pas aux pyrimidines, et que donc il fallait - en supposant un ratio pyrimidine/purine de 1 dans l'ARN - multiplier par 2 les résultats obtenus avec ce dosage pour obtenir la concentration réelle.  [...] Pourquoi le ration purine/pyrimidine serait il de 1 dans les ARN Ceci ne vaut que pour l'ADN double brin. Il faudrait retrouver le tableau avec les %CG en fonction des organismes (je l'ai pas retrouvé en cherchouillant vite fait sur le net). Maintenant il faut aussi tenir compte du fait que le dosage spectro n'est pas une méthode de dosage absolument précise avec les appareils classiques.  [...]