• Forum - Extraction, ADN, Transformation, Levure

L'extraction d'ADN génomique et transformation de levure

Alors j'ai du PEG (complexant des molécules H2O je crois) Mais je vois pas trop à quoi ça sert dans la transformation de cellules, de l'acétate de lithium (pour créer des pores) et de l'ADN de sperle de Hrang dénaturé (là je vois pas...) tout ça c'est pour le protocole de trasnfo.  [...] Sinon dans un tampon général pour l'extraction d'ADN, j'ai du TritonX-100 je sais que dans certain cas d'immunocytochimie c'est pour éviter que les molécules d'eau s'adsorbent sur une surface en verre mais là.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transfo directe levure vers bactérie

J'essaye depuis quelques semaines de transformer de l'ADN de levure dans des bactéries électrocompétentes, commerciales(E.Coli) sans passer par la case extraction d'ADN levure.  [...] Pour toi rien ne marche, ça veut dire quoi Peux-tu nous dire quel test tu effectues pour cribler les bactéries transformées des non transformées As-tu regardé si, sur ton ADN de levure, il y a une origine de réplication procaryote Et la première question que j'aurais dû te poser, de quelle nature est cet ADN que tu cherches à transférer de la levure à la bactérie Pourquoi.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN génomique

Et mon grand problème est que j'arrive pas à digérer une grande quantité d'ADN(200 Ml dans un volume de 500 Ml)mais dans un petit volume(10Ml dans 15Ml)j'arrive à digérer mon ADN...(concentration d'ADN est 400 ng/Ml).  [...] Autrement dit, pourquoi ne pas dissoudre son ADN dans de l'eau, histoire d'éviter les problèmes lié au tampon (vieillissement, oxydation, dégradation, pH modifié...etc.).  [...]

[Biologie Moléculaire] clonage moléculaire

bonjour à tous, lors d'un clonage moléculaire, avec pour cellule hôte, une levure (c.eucaryote), comment on procéde pour intégrer notre ADN insert dans cette levure...autrement reformulé. comment procéder pour transformer notre insert dans la levure.  [...] Tu ne mets pas comme ça ton insert ds la levure. Il faut passer par l'internmédiaire d'un vecteur par exemple un plasmide mais la nature du vecteur peut changer selon la taille de l'insert ou la nature de l'hôte récepteur.  [...]

[Biologie Cellulaire] Transformation levure par PCR

Je travail sur les levure et je souhaite les transformer afin qu'elles expriment ma protéine d'intérêt couplée à une protéine fluorescente. Pour cela j'utilise la technique. PCR based transformation method qui consiste à utiliser un plasmide (pRS306) qui contient la protéine fluo et faire une PCR avec des oligonucléotides codants pour les séquences de mon gènes que je veux marquer.  [...] Je comprend la théorie mais techniquement je ne vois pas du tout comment cela se produit, comment mon plasmide intègre mes séquences codantes Est ce que il faut digérer mon plasmide avant si vous avez des publi ou des revues qui explique ca en détail je vous en serais très reconnaissant.   [...]

Synthèse d'ADN in vitro

Si on utilise la matrice de l'ADN d'une levure pour la synthèse d'ADN in vitro quelle seront les proportions de A, C, G et T dans le nouvel ADN obtenu.Moi j'aurai tendance à croire que les proportions seront les mêmês.  [...] Pour l'ADNcomplémentaire simple brin. Si ton brin matrice comporte 20 % de A, 30 % de G, 35 % de C et 15 % de T, et bien le brin obtenu (complémentaire) comportera. 15 % A. 35% de G, 30% de C et 20 % de A.   [...]

taux de transfection pour les levures?

J'aimerais avoir une indication sur le taux de transfection espéré d'acide nucléique par electroporation (onde rectangulaire) aprés optimisation sur des levures.  [...] au fait on ne dit pas transfection mais transformation pour la levure.  [...]

real time pcr

Vous ne pouvez pas proceder avec le trizol Plus simple (autant qu'une extraction d'ADN), pas de phase de digestion de l'ADN (le trizol le bouffe)... tout pour soit quoi.  [...] Donc bon, si on met assez de trizol et que l'on laisse incuber assez longtemps on a pas de contamination. D'ailleurs, je me suis mal exprimé en disant bouffer. Ca n'est pas une dégradation de l'ADN mais simplement une séparation dans les phases. On a même reussit à faire des PCR à partir d'extraction trizol (m'enfin c'est lourdingue à faire).  [...]

[Microbiologie] effectuer la culture d une levure de boulanger a la maison a fin d'en extraire l'ADN

[Microbiologie] effectuer la culture d une levure de boulanger a la maison a fin d'en extraire l'ADN.  [...] D'ailleurs, il y a plusieurs possibilités (je me demande si l'enseignant s'attend à l'une d'elles). Vérifiez quand même le règlement de votre établissement en ce qui concerne l'introduction de certains liquides (drogue légale).   [...]

[Biologie Moléculaire] Molécule coloration ADN / électroporation / levure

Je vais peut être dire une absurdité, si ta levure est électroperforé, tu peux la transformer par un vecteur (plasmide ou autre) non conjugatif. Après tu peux lui coller un gène pour la synthèse d'une prot coloré X, et limite, un autre gène stoppant la croissance de ta levure si ça peux t'aider.  [...] Je pense que je pourrais regarder si ma technique d'électroporation augmenterai la sensibilité de mes levure à un antibiotique administré à faible dose par exemple... ca peut être un idée.  [...]