• Forum - Extraction, ADN, Quantité

[Biologie Cellulaire] Problème quantité d'adn plasmidique après extraction

Je viens vous trouver car j'ai un petit doute quand à une extraction d'adn plasmidique. Habituellement j'utilise des kit qiagen (miniprep) et j'obtiens environ 100ng/µl de plasmide.  [...] Merci pour vos renseignements. J'ai refait une extraction en utilisant des RNases et je me retrouve avec une quantité egale à celle obtenue avec les kits.  [...]

[Biologie Moléculaire] biologie moléculaire

Bonsoir, en biologie moléculaire nous avons étudié l'extraction de l'ADN, l'ARN et des plasmides. Bon l'ADN c'est facile mais l'ARN et les plasmides ça n'est pas très claire, j'ai fait des recherches sur le net mais ça ne m'a pas vraiment aidé,si il y en a parmi vous qui aimerait bien m'expliquer comment se font ces 2 extractions, je leur en serais très TRES reconnaissante.  [...] Les deux techniques les plus employées en laboratoire pour extraire de l'ADN plasmidique (je ne sais pas s'il y en a d'autres) sont. l'extraction au phénol-chloroforme et l'extraction à l'aide de kits industriels, type OMEGA, Sigma-Aldrich...etc. La première permet de récupérer une plus grosse quantité d'ADN plasmidique que la seconde, mais est plus délicate à réaliser.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ADN sur lame de paraffine

Je suis à la recherche d'infos pour optimiser mon extraction ADN à partir de lame tumorale incluse en paraffine. j'utilise un kit Qiagen. J'ai peu de tissu donc un rendement très faible ADN. 10 ug/ml. Ensuite la PCR de mon gène cible ne donne rien. Avez vous des trucs et astuce depuis le moment ou j'extrait de la lame jusqu'au moment ou j'élue pour augmenter ma quantité d'ADN purifié finale.  [...] Je ne connais pas ce kit mais il y a possibilité (si ce sont des colonnes) d'augmenter soit le rendement, soit la concentration en modifiant le volume d'élution, en faisant 2 élutions successives ou en utilisant du TE ou de l'eau a 40°.   [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ADN, ARN et protéines

Je voudrai savoir si quelqu'un connait une téchnique pour réaliser une triple extraction ADN ARN protéines.  [...] je souhaite réaliser une extraction ADN génomique sans kit. Je voudrais savoir si quelqu'un a un protocole qui marche avec une quantité de l'ordre de 50 à 100 ng d'ADN extrait pour faire une PCR ensuite.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème lors de la transformation avec DH5a E.coli.

Après extraction de mes bandes d'ADN obtenu sur gel, j'ai réalisée une purification avec le kit nucléoSpin Extract II de Macherey Nagel. Ensuite j'ai vérifiée sur gel que je n'avais pas perdu trop en quantité d'ADN pour la ligation. J'ai donc effectué la ligation sur vecteur de clonage pGEMT-easy de Promega en laissant une nuit à 4°C puis T°ambiante.  [...] J'ai travaillé sur E.coli DH5a, et je me souviens que si par miracle elle poussait après ligation+transformation, après une amplification, j'avais de très faible quantité d'ADN. Donc la bactérie est peut être aussi pourrite pour ce genre de chose.  [...]

échantillons d'adn

Bonjour, je recherche la meilleure méthode pour stocker le maximum d'échantillons d'adn (d'individus différents) dans un minimum d'espace. L'idée serait d'avoir l'adn de chaque individu d'une population dans un contenant le plus petit possible. Dans ce cas là vaut-il mieux stocker l'adn extrait ou stocker des tissus dont l'adn est potentiellement extractable.  [...] Selon la quantité de cellules dont tu disposes à l'origine, il existe différents kit d'extraction (de marque QIAGEN pour faire de la pub ) et permettant d'obtenir un volume d'environ 40 microlitres par patient. L'ADN est une molécule relativement stable. Tu peux les garder à -20°C sans que ca ne s'abime.  [...]

[Biotechnologie] Problèmes sur les notions/calculs de plasmide

Il choisit de faire pousser un certain nombre de colonoes bactériennes sélectionnées afin d'amplifier son plasmide et ainsi disposer d'une grosse quantité de son insert NIACUSE pour le séquencer et vérifier son intégrité. Il récolte les plasmides après lyse alcaline des bactéries et extraction de l'ADN au phénol/chloroforme.  [...] As-tu quelque part une information en chiffres de la taille de la banque d'ADN genomique ou d'ADNc Ou tu as juste une information concernant ces inserts precis.  [...]

Extraction d'ADN de l'olivier

Bonjour je travail sur l'identification des variétés locales d'olivier en utilisant les marqueurs SSR et je suis en train de faire l'extraction d'ADN mais j'ai un problème avec la quantité obtenu qui est ou bien faible ou nulle. Est ce que quelqu'un peut me donner conseil pour améliorer mes résultats et merci.  [...] Le soucis avec les végétaux est la présence de fortes concentrations en sucre qui peuvent rendre incompatibles les protocoles adaptés à d'autres cellules.   [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination d'ARN par de l'ADN

Je viens de rechercher sur le net des explications sur la contamination ADN que j'obtiens en réalisant mes extractions ARN et je suis tombée sur le forum de futura science où en janvier 2003 yoyo indiquait qu'il y a certaines taq qui peuvent reverse transcrire de l'ARN.  [...] Les essais ont révélés que la DNase du kit Machery Nagel ne fonctionnait pas assez sur colonne (amplification en PCR du plasmide ajouté pendant l'extraction d'ARN). Dans la notice de cette DNase il est précisé qu'en cas de grosse quantité d'ADN, il faut utiliser la DNase après colonne puis réaliser un clean up.  [...]

[Biochimie] Concentration d'un produit PCR

Cette technique sert surtout à doser la concentration après extraction. C'est souvent ce même ADN qu'ensuite on utilise en PCR, donc on le multiplie de façon exponentielle.  [...] Après extraction par kit, je tourne souvent autour de 0.3, après une dilution au 1/8 et mon éluat fait 100µl. Ca correspond donc à... 12µg si mon calcul rapide ne me trompe pas. Je dois avouer que je me suis jamais amusé à quantifier l'ADN après PCR mais on doit quand même avoir une jolie petite quantité.  [...]