• Forum - Extraction, ADN, Cellules, Détergent

Connaissez-vous des expériences simples et amusantes ?

A l'occasion d'Eposcience, j'avais présenté l'extraction de l'ADN de banane. Ca marche à tous les coups et c'est très facile. C'était une expérience adaptée des Petits Débrouillards, peut etre peux tu trouver d'autres expériences sympa sur leur site.  [...] j'arrive un peu tard mais j'ai aussi realise une experience d'extraction d'ADN lors d'une manifestation genre fete des sciences, devant adultes et enfants. Avec de la tomate si mes souvenirs sont bons... il faut juste du lique vaisselle (detergent pour casser les cellules) et du sel.  [...]

[Biotechnologie] Souches d'expression et préparation de plasmides

2* L'extraction d'ADN plasmidique consiste à effectuer la lyse des cellules au moyen d'un détergent (dodécyl sulfate de sodium) en présence de soude, à pH 13. A ce pH très alcalin, l'ADN est dénaturé, c'est-à-dire que les deux brins de la double-hélice sont séparés.  [...] L'ADN plasmidique, court (~10³ pb), parvient à se reformer et reste en solution. On sépare alors les espèces par centrifugation. Les protéines précipitées, sont également éliminées avec le détergent et l'ADN chromosomique.  [...]

[Identification] Trypsinisation avant 2D-LC-MS/MS : CaCl2 ?

Dans mon protocole de trypsinisation de solution, j'utilise du PPS (pour ses propriétés détergentes compatibles MS/MS) et CaCl2 (1mM). Mais je ne comprend pas pourquoi j'utilise du CaCl2.  [...] Ps. Je travaille sur des cellules d'Arabidopsis thaliana, j'ai fait l'extraction protéique par précipitation au TCA (j'ai utilisé de l'urée comme détergent). Après ma trypsinisation, je fais du 2D-LC-MS/MS.  [...]

[Biotechnologie] cytométrie de flux

Si mes souvenirs sont bons, on utilise bien la cytométrie pour caractériser les cellules en train de mourir. En général, on distingue les cellules en apoptose de celle en nécrose (deux types de morts cellulaires différents). Pour l'apoptose, on fait des marquages à l'annexin V (se fixe sur des phosphatidylsérine de la membrane plasmique).  [...] En général, on considère que c'est une étape précoce de l'apoptose. Cependant je ne suis pas sur à 100% que ça ne marque pas les cellules en nécrose. On utilise également l'iodure de propidium (marqueur de l'ADN) pour les cellules en apoptose, il faut utiliser un détergent pour permettre à l'iodure de propidium de rentrer alors que pour les cellules en nécrose ça rentre tout seul (ce qui permet de les différencier).  [...]

[Identification] Extraction d'ADN

NaCl et le détergent ont plutôt un rôle dans les phases d'extraction de l'ADN mais ça m'étonnerait que l'exercice te demande de donner leurs rôles.  [...] Le broyage ne sert pas à éclater les cellules. Une cellule c'est minuscule et ca résiste au pilon. Le broyage sert juste à eclater les tissus et séparer les cellules pour pouvoir ensuite les rendre accessissbles au détergeant qui lui va lyser les membranes et en liberer le contenu.  [...]

Sensibilité et hypersensibilité à la Dnase I

Salut à tous. Je voulais savoir qu'elle est la différence entre la sensibilité et l'hypersensibilité à la DNase I. Je sais que c'est en rapport avec la structure de la chromatine et l'accessibilité de facteurs de transcription à certaines régions de l'ADN mais je n'arrive pas a voir la différence entre les deux. Merci.  [...] on utilise des cellules traitées au NP40-détergent non ionique).  [...]

protocole d'extraction d'ADN

la mon encadrant me demande de lui chercher tous les méthodes d'extraction d'ADN pour les Actinomycetes vu les streptomyces et leur problèmes.  [...] L'ADN plasmidique, court (~10³ paires de base), parvient à se reformer et reste en solution. On sépare alors les espèces par centrifugation. Les protéines précipitées, sont également éliminées avec le détergent et l'ADN chromosomique.  [...]

[Biologie Moléculaire] PVP CTAB extraction d'ADN

Le CTAB (Cetyltrimethylammonium bromide) est un détergent permettant la dissolution des sucres et la précipitation de l'ADN.  [...] Le PVP (Poly(n-vinyl-2 pyrolidone)) permet d'éliminer certains inhibiteurs de PCR et protège des effets néfastes des produits de la réaction de Maillard.   [...]

[Biochimie] extraction protéines membranaires à partir de tissu cérébral congelé (pour étude de co-IPP)

Le NP40 est trop un détergent trop doux pour moi si tu veux détruire tes membranes. Je travaille sur des cellules en culture donc mon protocole sera légèrement différent, mais si j'étais toi j'essaierais tampon un tampon de lyse 1% NP40 et 1% SDS (il y d'autre composant mais je n'ai pas la liste sous les yeux, je pourrais te dire ça plus tard si tu y tiens).  [...] 100% d'accord. Après comme tu le dis, délicat dosage extraction - solubilisation - protection. Tu devrais essayer sur des échantillons qui ne sont pas précieux à quelle limite de détergent tu arrives à solubiser ton récepteur.  [...]

Transfection et récupérer protéine

je pensais à transfecter une cellule CHO avec un plasmide contenant l'ADNc. La machinerie cellulaire va synthétiser la protéine mais ensuite comment isoler et purifier la protéine.  [...] Il faut faire attention lors de la synthèse, choisissez bien votre promoteur, cherchez dans la littérature il doit exister des constructions particulières pour les protéines membranaires. Faites également très attention au détergent que vous utiliserez lors de l'extraction pour essayer de la garder votre protéine la plus soluble possible.  [...]