• Forum - Expression, Question, Promoteur

[Biochimie] Plasmide de clonage et d'expression

je suis à la recherche d'un professeur de biochimie ou une personne pouvant me dire concrètement comment distinguer par l'intermédiaire d'une carte de restriction si [un plasmide est dit de clonage ou d'expression.  [...] POur ta question sur les plasmides, la seule difference entre un plasmide de clonage et un plasmide d'expression, est que le second possede un promoteur permettant l'expression du gene.  [...]

système Cre-ER(T2)

Tout n'est qu'une question de promoteur. En plus claire, le promoteur qui sera utilisé pour conduire l'expression de ta fusion Cre-ER peut etre constitutif, dans ce cas Cre-ER sera exprimé dans tous les tissus mais défloxera que si l'animal recoit l'agoniste de ER.  [...] ou bien le promoteur est tissu-spécifique et c'est là ou les choses se compliquent car en réalité il faut parler de promoteur tissu-sélectif et non plus de tissu-spécificité. En plus claire, un promoteur qui est censé entrainé l'expression du transgene dans le muscle squelettique uniquement (car c'est ce qu'il fait naturellement lorsqu'il est dans le genome à son locus), présentera des fuites transcriptionelles plus ou moins négligeable cad suivit ou non de la synthese de Cre-ER (ou de tout autre transgene).  [...]

[Biotechnologie] Induction vs. expression

Par exemple, tu va avoir une séquence avec un promoteur inductible, qui une fois activé induira l'expression de la protéine en amont de la séquence.  [...] Si j'ai une souche ne portant pas de système d'expression dépendant de l'induction à l'IPTG, c'est mal barré Puis, faut aussi voir que dans la souche d'expression en question l'IPTG doit induire préférentiellement le promoteur dont est dépendant le gène d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] rrnB plasmide pMALc2x

Petite question de biologie moléculaire, j'ai ajouté mon gène d'intérêt dans le vecteur pMALc2x afin de produire ma protéine avec le tag MBP. Le promoteur est le promoteur tac inducible par IPTG pas de problème, mais à quoi correspondent les régions rrnB ce serait des terminateurs, mais pourquoi je ne les ai jamais vu sur les autres vecteurs d'expression type pET par exemple et surtout qu'est ce que cela apporte de plus, pourquoi avoir choisit un terminateur qui se compose de 2 régions.  [...]

Faire suivre une promoteur eucaryote et procaryote

Dans la construction du plasmide il est précédé du promoteur du CaMV 35S. Cependant pour réaliser la selection des bactéries transformé puis des cellules végétales transformé, on a besoin de l'expression de NPTII à la fois dans les bactéries et les cellules eucaryotes.  [...] Ma question est donc a-t'on pu laisser le promoteur procaryote initiale de NPTII, précédé du promoteur eucaryote 35S pour avoir une expression dans les deux situation, cela fonctionnerai t'il d'avoir deux promoteur qui se suivent Où a t'on simplement fait deux copies du gène NPTII, un avec son promoteur initiale l'autre avec le 35S.  [...]

[Biologie Moléculaire] Production protéine ?

Je ne connais pas ta protéine, mais je sais que DO 0,8 n'est pas encore une phase stationnaire pour E. coli. Ce qui signifie que le promoteur contrôlant l'expression du gène qui code ta protéine (on y arrive, on y arrive ) est encore un peu actif et il y a donc une petite production de la protéine en question.  [...] Aussi, laisser les bactéries longtemps en phase stationnaire-like n'est pas super. elles pigent qu'elles doivent se serrer la ceinture et des protéines qui ne servent à rien (donc, ta protéine d'intérêt ) leur sert de stock d'aa.   [...]

[Biologie Cellulaire] Comment, après transgenèse à l'aide d'un adénovirus, le gène épisomal, non réplicatif est répliqu...

MAIS, dans l'article ils précisent avoir construit le transgène de telle façon que l'expression du transgène (et non pas sa présence ou son absence) sera contrôlée, entre autre, par un promoteur spécifique des cônes (je cite l'article. Serotype 2/5 recombinant adeno-associated virus (rAAV) containing a human L-opsin gene under the control of the L/M-opsin enhancer and promoter [.  [...] Une partie de la réponse à cette question se trouve ci-dessus (expression enhancer/promoteur-spécifique). Donc pas de soucis pour l'opsine S. Mais effectivement, il y a co-expression des opsines L et M. Dans l'article, l'explication est que cette co-expression va induire une remodelage cellulaire conduisant à la formation d'un nouveau type de cône ( Co-expressing the L-opsin transgene within a subset of endogenous M-cones shifted their spectral sensitivity to respond to long wavelength light, thus producing two distinct cone types absorbing in the middle-to-long wavelengths, as required for trichromacy. ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Essais luciferase promoteur miRNA

La question que je me pose est la suivante. Etant donne que l'expression des miRNA est differente des mRNA (a priori plus faible), est ce qu'il ne serait pas judicieux d'augmenter la quantite de plasmide promoteur+luciferase dans mon experience (par rapport au protocol pour promoteur mRNA).  [...] Si quelqu'un a deja fait un essai luciferase sur des promoteurs miRNA, je suis interesse pour savoir la quantite de plasmide utilise (par rapport aux autres plasmide transfectes).  [...]

[Biologie Moléculaire] Fournisseur plasmide d'expression (avec ORF spécifique)

Je recherche une boite qui pourrait me fournir (rapidement) un plasmide d'expression avec l'ORF de mon choix (de la même manière que l'on choisi des siRNA dans une banque).  [...] La question que l'on pose à l'aide de ce plasmide est urgente donc j'aimerai trouver le plus vite possible un plasmide d'expression AVEC PROMOTEUR et l'ORF d'intérêt. J'ai regardé chez Dharmacon, Invitrogen, Qiagen, Eurogentec et je n'ai rien trouvé.  [...]

Mammalian Expression Vectors

J'aimerai savoir si quelqu'un pouvait me conseiller un vecteur d'expression pour mammifère dans le but de sur-exprimer un gène de façon stable dans des cellules humaines. Un vecteur non inductible et taggé à l'eGFP ou à la luciférase serait le top. En effet, il en existe un grand nombre sur le marché et je ne sais lequel choisir.  [...] Remarque dans le sens de la question de J Luc. Il me semble que la cycline E intervient dans la régulation du cycle cellulaire... Donc l'exprimer (en plus sous le contrôle d'un promoteur fort) est pour moi assez difficile, je pense que les cellules qui vont exprimer cette prot vont être complètement dérégulées, ou il y aura une modification de l'expression de ta prot exogène pour minimiser son effet néfaste et tu ne sélectionneras que des clones qui l'exprimeront peu ou pas du tout.  [...]