• Forum - Expression, Protéine, Site

[Biologie Moléculaire] activité des protéines recombinantes

[Biologie Moléculaire] activité des protéines recombinantes.  [...] 2) Oui, il suffit d'insérer un site de clivage entre la GST et la protéine d'intérêt. Il existe des vecteurs contenant déjà ce site de clivage en amont du MCS, par exemple le Pgex6P1 pour l'expression en bactéries.  [...]

[Biologie Moléculaire] Site de glycosylation

Le site de glycosylation de ma protéine n'a pas d'effet sur son activité biologique donc je peux tenter le système d'expression bactérien.  [...] Une glycoprotéine, ça s'exprime en général très mal en bactérie. Les N-glycosylations jouent un role central dans le repliement des glycoprotéines et leur suppression se traduit souvent par l'aggrégation massive de la protéine. Tu la verras sur un gel mais elle sera probablement incapable de quoi que ce soit.  [...]

Expression de gènes

Mais ce n'est pas parcque l'on connait le code génétique que l'on arrive à le comprendre. Identifier un gène et son promoteur au niveau informatique signifie qu'ensuite, il faut vérifier son expression (et comme vous le dites, ce gène peut n'être exprimé que dans certains tissus ou stade de développement, par exemple).  [...] Ce site regroupe les informations de tout un tas d'autres databases, et permet de visualiser fonctions, localisations intrqcellulqire, domaines de la protéine, les différents transcripts, son expression dans différents types cellulaires et présente bien sur toutes les sources.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression hétérologue de protéine : vecteur baculoviral

* existe-t-il un moyen de savoir si une protéine forme des ponts S-S (programme bio-info, un test in vitro,...) Je me dis que l'on est parti pour une production cytoplasmique mais sans certitude que la protéine fasse des ponts S-S ce qui pourrait être l'origine de mon problème.  [...] Je fais déjà une production cytoplasmique chez coli. Si je mets du KI c'est justement pour éviter au maximum les corps d'inclusion. Outre la structure, il me faut la protéine en forme pour les études fonctionnelles Donc, si je dois choisir entre jongler avec un tas de solutions chimiques qui l'agressent et jongler en bio mol pour la faire produire dans des cellules plus adaptées, je préfère la seconde solution.  [...]

[Biochimie] Expression anormale d'une protéine exogène

Nous avons ensuite pris un nouveau stock de HEK qui ont fait exactement la même chose. a savoir qu'au départ l'expression était correcte puis la protéine s'est retrouvée bloqué dans le cytoplasme. Comment peut on expliquer ce type de changement dans l'expression et surtout que faire.  [...] Je suis en train d'essayer de faire la même expérience avec des Hela. Ma préparation de plasmide à environ 1 ans mais je fais naturellement des aliquots et mon stock courant n'est pas congelé mais conservé à 4°C. Concernant l'agent de transfection cela n'explique pas pourquoi lors de mes premières expériences je me suis trouvé avec une expression correcte de la protéine et pas par la suite.  [...]

[Biochimie] Petite question sur le Western Blot

Maintenant si on prend le cas où c'est justement sur la protéine B que tu normalise la protéine A (imaginons que l'actine bouge, comme cela arrive dans certains lignées), tu vas voir une augmentation de B seule et c'est un résultat en soit. ta protéine de normalisation est modulée par ta drogue.  [...] Après il faut voir si ce résultat t'intéresse ou pas. Mais tu dois par contre normaliser ta protéine A sur une autre protéine dont l'expression ne change pas.  [...]

[Immunologie] expression et phosphorylation de la protéine

[Immunologie] expression et phosphorylation de la protéine.  [...] On peut même imaginer que ton anticorps en immuno reconnait pas la forme phospho de manière spécifique, donc que tu n'observes pas ce que tu veux.   [...]

[Biologie Moléculaire] Dominant négatif

Bonjour à tous je voulais savoir comment marche la technique de dominant négatif et comment l'utiliser concrétement pour inhiber une protéine et est ce un K out ou plutot down c'est à dire avec quelle efficacité l'expression de la protéine peut elle être réduite merci beaucoup pour vos réponses.  [...] Cette technique revient donc un peu à empêcher l'expression (même si c'est pas le cas) de la protéine endogène, et tu vas ainsi pouvoir voir ce qui se passe lorsque ta protéine est absente.  [...]

[Biochimie] Purification de protéine recombinante de faible PM

Normalement, faire un western afin de valider la production de la protéine dans le système d'expression est la première chose à faire. Cela peut éviter de gaspiller inutilement le matériel nécessaire à la purification de la protéine.  [...] Je ne suis pas tout a fait d'accord. Tu DOIS voir ta proteine en coomassie. Si tu ne la vois qu'en WB tu peux considerer que l'expression n'est de toute facon pas suffisante pour une purif alors il faut travailller les conditions d'induction, rien ne sert de depenser ton temps et ton energie en WB.  [...]

[Génétique] Prediction de sites de liaison de facteurs de transcriptions

Je suis actuellement en train d'étudier le niveau d'expression d'une protéine chez une l'Homme et j'aimerais le rapporter à des polymorphismes de la région promotrice. J'aimerais tester les différents variants alléliques à l'aide de sites/logiciels de prédiction de sites de liaisons aux facteurs de transcription pour voir si un polymorphisme est plus vraisemblablement impliqué que les autres.  [...] J'ai testé avec un site utilisant Cister ( http.//cagt.bu.edu/page/Cister_about ) et j'aimerais recouper avec d'autres sources. Pourriez-vous me faire part de vos sites favoris.  [...]