• Forum - Expériences, Migration, échantillons

[Génétique] Migration dans la mauvaise direction...

Je réalise actuellement des expériences en laboratoire et j'ai quelques problèmes avec la migration de mes échantillons après purification sur le gel d'agarose.  [...] J'ai réalisé une purification avec le protocol et kit QIAquick de QIAGEN( QIAquick gel extraction kit protocol avec microcentrifuge) mais lors de la révélation du gel de l'electrophorèse j'ai pu constaté que tous mes échantillons avaient migré dans le sens opposé habituel, se retrouvant au dessus des puits.  [...]

[Biologie Moléculaire] kit d'empreinte génétique de Bio-rad

bonjour. j'ai étudié le kit de bio-rad pour l'empreinte génétique ainsi que leur exemple représentatnt les étapes de l'expérience. Au laboratoire, nous utilisons du BET pour l'eléctrophorèse avec observation sous U.V mais c'est un produit cancérigène alors que pour le kit, ils fournissent un colorant bleu pour la visualisation de la migration des échantillons d'ADN sans U.  [...] V et sans risques, mais ils n'ont pas précisé le nom du colorant bio-safe DNA stain. en faisant une petite recherche, j'ai trouvé le bio-safe coomassie stain mais utilisé pour les protéines. est ce que ce colorant est utilisé aussi pour la coloration de l'ADN et quel autres colorants bleu sont utilisés merci pour votre réponse.   [...]

[Biochimie] Améliorer la quantité, qualité et pureté d'une extraction d'ARN

J'ai obtenue une concentration pour la méthode de précipitation de 1240 ng/µL avec les ratios de 260/280 est de 1,66 et 260/230 la valeur est de 1,59 permettant de dire qu'il y a une très grande contamination en matière organique. Pour l'échantillon de colonne est de 440 ng/µL Pour l'échantillon de colonne, la valeur du ratio 260/280 est de 2,08 permettant de conclure qu'il n'y a pas de contamination protéique.  [...] Je me suis trompé d'image. Voici l'image de la migration des échantillons pour les 2 méthodes Mon coéquipier et moi avons fait les mêmes méthodes donc on a 2 échantillons de chaque méthode. Toutefois, dans les échantillons extrait par colonne sont plus dégradés ce que j'arrive pas à comprendre.  [...]

[Identification] Identification d'une protéine sérique

j'aurai besoin de réponses. Voilà, cette semaine j'ai effectué une migration sur gel de plusieurs échantillons de sérums humains différents. Il s'agit d'électrophorèse SDS PAGE. La migration des protéines sériques se fait donc en fonctions de leurs tailles.  [...] Je te conseille de refaire migrer les échantillons avec le marqueur de poids moléculaires. On peut aussi envisager qu'il s'agisse de protéines non sériques (problèmes de purification), d'éventuels précurseurs ou bien au contraire de produits de dégradation de protéines sériques.  [...]

[Biologie Moléculaire] Migration SDS page en "sourire"

Je rencontre récemment un problème avec mes migrations SDS page. la migration ne se fait pas de manière droite, mais remonte de chacun des deux cotés, formant un front de migration en sourire, très génant s'il y a des échantillons placés aux extrémités.  [...] Cela cause une migration plus lente des échantillons des puits périphériques caractérisé par des bandes protéiques ayant migré plus rapidement au centre du gel, créant un patron ayant la forme d'un sourire... Pour assurer un refroidissement uniforme de tout le gel, diminuer le voltage et augmenter la durée de migration.  [...]

[Biochimie] Pb échantillon gel Tris-Tricine

Je travaille sur un peptide inférieur à 3 KDa et je voulais le visualiser en western blot. Mais je rencontre un petit problème. lors de la migration en gel tris-tricine, mes échantillons se reserrent )( dans mon gel de séparation. Pb de sels Mes échantillons sont préparés avec des cellules fraîches et broyées directement dans le tampon d'échantillon.  [...] Rq. une migration test pour le même type de gel (mêmes réactifs) a fonctionné avec d'autres échantillons (culots secs congelés d'autres cellules).  [...]

[Biologie Moléculaire] Transcription in vitro de sondes ARN marquées

J'ai pourtant dénaturé mes échantillons 10min à 70°C (puis glace) avant l'électrophorèse. Il faudrait donc carrément faire une migration en agarose + formaldehyde.  [...] On n'utilise plus de bromure d'ethidium au labo, et je ne sais pas comment le GelRed se comporte en conditions dénaturantes. Je ne connais pas non plus la composition du Tp de charge fourni (c'est là que les solutions alternatives au BEt pêchent...).   [...]

probleme DGGE

Je suis actuellement en stage dans un laboratoire d'analyse du sol. J'ai pour but de faire migrer plusieurs échantillons de terre selon des conditions différentes à travers un gel DGGE.  [...] Cependant lors de la migration seul le lader migre (seulement deux bandes...) mais les échantillons se diffusent dans les puits et ne migrent pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Blot: pourquoi papier filtre ?

Sans grande conviction, il me semble que cela sert à éliminer les bulles d'air qui pourrait se placer entre le tampon et la membrane d'un côté, entre le tampon et le gel de l'autre. Ca rejoint un peu ce qu'a dit fxmulder, et évidemment, il ne faut pas qu'il y ait de bulles d'air entre le gel et la membrane.   [...] dans le cas d'un transfert semi-sec, le papiers filtres sont imbibés du tampon de tranfert. Ils servent donc de reservoir a tampon pour permettre le passage du courant et donc la migration des echantillons.  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN et contaminants

Ensuite, pour tes manips sur gel, pense à mettre un marqueur de taille, c'est un controle indispensable pour pouvoir comparer la migration de tes échantillons avec quelque chose de connu (le marqueur). Cela te permet aussi de détecter tout problème de migration (pas assez ou trop migré par exemple ).  [...] Comme je pense que tu as quand même fait suffisement migré (voire trop si c'est de la manip dont tu parlais dans un post précédent) (le colorant bleu ayant migré jusqu'au 1/3-2/3 du gel. A l'inverse d'un gel de protéine, on ne fait jamais sortir le bleu sur un gel d'agarose), il n'est pas possible que ce ne soit que des ARN, car dans ces conditions (gel agarose 1%), il faudrait que tes ARN fassent plus de 20-30kb pour être cette pattate.   [...]