• Forum - Exercice, étapes, Plasmide

[Biotechnologie] Le clonage

Je suis devant un exercice où je dois donner les différentes étapes me permettant de construire un plasmide recombiné. Celui-ci ayant deux site de restriction CpoI. Je dois y inserer un gène, mais dans la séquence de part et d'autre du gène je n'ai pas de site de restriction.  [...] J'ai en plus sur ce plasmide, un gène de résistance à la Kanamycine, comment se fera son expression (je pense par des ARN polymérases provenant du génome bactérien).  [...]

isolation d'un plasmide

Succintement voici les etapes d'une préparation de plasmide. On joue sur le fait que le plasmide soit une petite molécule d'ADN superenroulée.  [...] Tout agit avec tout. L'ADN plasmidique, plus petit et plus compact peut retrouver lui sa forme native et reste exclu du précipité. Dés lors, un étape de centrigugation permet de séparer le plasmide (et les petites protéines et des ARNs) restés en solution, du reste précipité au fond du tube.  [...]

[Biochimie] technique du microscope électronique en transmission

On me demande dans un exercice de décrire les étapes de la technique ayant permis d'obtenir un cliché d'une membrane plasmique. J'en ai déduit vu l'image qu'il s'agissait d'un microscope électronique en transmission mais j'ai vu aussi la cryofracture qui pourrait correspondre.  [...] Il s'agit bien de deux techniques différentes d'observation au microscope électronique à transmission. Elles ne donnent pas du tout les mêmes informations sur la membrane.   [...]

[Biologie Moléculaire] Réplication de l'ADN chez les eucaryotes SOS

en gros les 2 réplications eucaryote et procaryote sont très similaires que dans leurs grands principes (bidirectionnelle, antiparallèle, sens 5'3', complémentaire, nécessite des amorces) mais pas dans les détails (enzymes pas meme fonction c'est le cas pour ce que j'ai dit précedemment ou encore inexistence des fragments de Kleenow chez les procaryotes. (n'est-ce pas)).   [...] Les études réalisées avec le plasmide ori C permettent de comprendre quelles sont les étapes de l'initiation à l'origine de réplication de E.coli. Schématiquement, ces étapes sont.  [...]

[Biologie Moléculaire] inverse PCR

je sais qu'il existe une différence entre l'inverse PCR et RT PCR, mais le problème c'est que j'ai pas bien compré le principe de l'inverse PCR et quelle est l'interet des plasmides dans cette technique.  [...] Et on utilise pas de plasmide... Ce que tu peux confondre avec un plasmide n'est qu'une séquence d'ADN génomique qui s'est refermée sur elle-même... (une des étapes de l'inverse PCR).  [...]

[Biologie Moléculaire] vecteur

On récupère les bactéries par centrifugation. Puis, on perméabilise la paroi bactérienne par un traitement doux permettant d'obtenir un passage en solution des plasmides qui sont plus légers que l'ADN bactérien. La purification des plasmides peut être ensuite réalisée par chromatographie liquide à haute performance ou ultra-centrifugation en gradient de densité.  [...] Les bactéries peuvent être placées dans certaines conditions physico-chimiques pour permettre aux plasmides d'être incorporés à l'intérieur de celles-ci. Les bactéries traitées et prêtes à recevoir l'ADN étranger sont appelées bactéries compétentes. L'incorporation des plasmides dans les bactéries est appelée transformation bactérienne.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction plasmide - centrifugation

Je dois centrifuger 30min à 15000G mon plasmide (dans un Falcon 50 car dans un volume d'environ 40mL à cette étape). Il est possible, pour ceux qui n'ont pas LA centri ou LE rotor qui va bien, de faire tourner à 5000G seulement (Falcon 50 coniques) mais pendant 1h.  [...] Une dernière question. congelez vous vos culots de bactéries avant extraction Si oui, quelle est la plus longue durée pendant laquelle vous les avez oublié au congélateur sans altération des plasmides.  [...]

[SVT 3ème] étapes de division cellulaire

Je ne sais pas ce que tu as vu pendant tes cours, est-ce que tu as entendu parler de la meiose Mais une chose est sur se n'est pas en se divisant que la cellule oeuf donne un embryon. C'est la réunion de deux gamètes de sexe différent. Chez l'homme c'est par exemple le spermatozoïde et l'ovocyte.   [...] Mais une chose est sur se n'est pas en se divisant que la cellule oeuf donne un embryon. C'est la réunion de deux gamètes de sexe différent. Chez l'homme c'est par exemple le spermatozoïde et l'ovocyte.   [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

Sans vouloir etre mechant, quitte a faire une ligation pourquoi ne pas l'avoir faite avec le plasmide Tu aurais vite vu si ton produit etait bien digere ou non. De plus, la majorite des problemes viennent d'un plasmide mal digere, et non d'un insert mal digere.  [...] Je digère en deux étapes le plasmide avec SpeI et SacII (je déphosphoryle vers la fin de la deuxième digestion en ajoutant CIAP) et je l'extrait du gel, je le purifie. (j'ai tout vérifié et ai essayé par digestions croisées) Le plasmide semble apte à recevoir l'insert.  [...]

amplification dans un plasmide

je m'interrsse à la transgenèse et j'ai lu qu'une des étapes pour fabriquer un OGM était l'amplification du plasmide chez l'E.coli.  [...] Lorsqu'on insert une molecule de plasmide chez coli, la bactérie va rpliquer le plasmide jusqu'a avoir 50 à 100 molécules par bactéries.  [...]