• Forum - éthanol, ARN, Précipitation

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN ethanol 70%

Ensuite, il s'agit de précipiter les ARN, on incube avec de l'isopropanol, à quoi sert t'il dans la précipitation Après centrifugation on enlève le surnageant, et on ajoute de l'ethanol a 70%. On me pose la question pourquoi 70% et non ethanol pur J'imagine que la différence se fait au niveau de la fraction d'eau de l'ethanol 70% mais je ne sais pas quoi répondre.  [...] l'ethanol 70% sert a laver l'ARN c'est a dire de permettre de dissoudre certains sels qui ont été utilisés pour la précipitation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN

Après avoir extrait les ARN totaux au phénol/chloroform, je les ai précipités directement à l'éthanol 70% au lieu de l'éthanol absolu et mis à -20° toute la nuit. Du coup, la précipitation ne sera pas parfaite.. Comment pourrais-je rattrapper cette bétise Dois je rajouter du PEG, ou de l'acétate de sodium 3M ou du NaCl 3M pour mieux favoriser la précipitation dans l'éthanol 70%.  [...] 1 volume essayez d'ajouter encore un volume d'absolu, ou alors 2 vol d'isopropanol à la limite. Pour l'acétate 3M en principe c'est trop tard.   [...]

[Biologie Moléculaire] Isolation d'ARN et élimination de DNase

Par contre, vu que je n'ai plus de colonnes, je ne pourrai pas faire un clean-up. Dois-je laisser la DNase ou puis m'en débarrasser autrement comme par la précipitation de l'arn avec de l éthanol et de l'acétate de sodium. Sachant enfin que je perds en rendement à chaque précipitation et que certains de mes organes sont très petits.  [...] oui il faut s'en débarrasser. la DNase s'inactive 15min a 75°, mais ce n'est peut être pas l'idéal. Précipiter a l'isopropanol ça peut le faire, mais effectivement il y aura des pertes. Mon expérience. j'utilisais du RNAplus, ça ressemble au trizol, et je n'ai jamais eu de problèmes d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN

protocole Trizol marche bien en veg, sinon CTAB pour les récalcitrantes (genre riches en phenols) et si malgré ca tes ratios sont toujours mauvais, après l'extraction passe par une purification phenol-chloroforme et précipitation a l'ethanol.  [...] sinon faire un mélange avec methanol-chloroforme (récupérer la phase supérieur) suivi d'un mélange chloroforme (récuperer la phase supérieur) suivi d'une précipitation à l'acetate de sodium et ethanol (0.3M finaux d'acetate de Na, avec 2.5V de ethanol 99%, une heure a -20°, centrifuger récupérer le culot et le laver avec 250 microlitres ethanol 70%, centrifuger evacuer l'ethanol et resuspendre en eau-DEPC ) permet normalement d'avoir une bonne qualité d'ARN sans trop de pertes.  [...]

[Biologie Moléculaire] rt pcr

Précipitation à l'éthanol, à l'isopropanol, dessiccation au butanol puis lyophilisation, speed-vac.  [...] Comme tout ça a l'air d'un exercice qu'on te pose, on va rester dans du classique, précipitation à l'ethanol. La précipitation à l'ethanol est préférée ici car on dispose d'un faible volume d'ARNs (a priori, pour une RT-PCR). Celle ci nécéssite 2.5 volumes d'ethanol contre 0.  [...]

[Biologie Moléculaire] les ARNs et extraction

En fait le protocole est fait de manière classique. Extraction au chloroforme d'environ 5 millions de cellules. récupération de la phase aqueuse, centrifugation et lavage et précipitation a l'éthanol. on redissoud le culot dans 10 µL d'eau. on a un rapport de pureté a peu près de 1.  [...] Personnellement je ne fais pas de précipitation à l'ethanol pour les ARNs mais à l'isopropanol. Ensuite je rince le culot à l'ethanol 70%.  [...]

[Génétique] Précipitation de l'ADN dans l'éthanol, pourquoi une T° basse?

[Génétique] Précipitation de l'ADN dans l'éthanol, pourquoi une T° basse.  [...] J'aimerais savoir pourquoi le rendement de la précipitation de l'ADN dans de l'éthanol augmente lorsque l'on baisse la t°.  [...]

[Biologie Moléculaire] Questions de Biologie moléculaire

4-Pour quoi on utilise l'isopropanol et pas l'éthanol pour la précipitation.  [...] 4*La précipitation des acides nucléiques peut se faire à l'aide de l'éthanol ou l'isopropanol, la différence réside dans le fait que la méthode à l'éthanol nécessite la présence de sel et la précipitation se réalise par addition de deux volumes d'éthanol à un volume de la solution, alors que la méthode à l'isopropanol ne nécessite pas la présence de sel et la précipitation se fait par un mélange volume à volume.  [...]

[Biologie Moléculaire] biologie moléculaire

Tu lyse tes cellules avec un réactif acide contenant de l'isothyocyanate de guanidium et du phénol. On fait une séparation par centrifugation avec du chloroforme ou du bromochloropropane. Tu obtiens une phase aqueuse (ARN), une interface et une phase organique.  [...] On prélève l'ARN puis une précipitation à l'isopropanol, puis centrifugation. On a l'ARN qui précipite, on lave le culot et on solubilise l'ARN dans du formamide désionisé.  [...]

[Biochimie] L'acétone à froid dans l'extraction de l'ARN

Oui effectivement je confirme que l'utilisation de l'acétone est fait pour la précipitation des protéines, c'est vraie qu'on utilise généralement l'éthanol pour la précipitation des protéines, maintenant la précipitation à l'acétone est aussi plus efficace car, contrairement à l'éthanol, très peu de protéines sont solubles dans l'acétone.  [...] Si mes souvenirs sont bons, une fois qu'on a une interface claire après les lavages au phénol, on met de l'acétone avec notre solution d'ARN, on la laisse au froid toute la nuit puis on centrifuge longtemps à forte vitesse pour précipiter l'ARN. On obtient alors un culot qui ne contient que l'ARN q'on sèche alors par 1 ou 2 lavages à l'éthanol.  [...]