• Forum - étapes, Protocole, Clonage

[Microbiologie] dégradation de l'ADN

2) je suis entrain de préparer des bactéries compétentes au moment ou j'ai voulu mesuré la densité optique à 600nm j'ai trouvé 0,828 et donc la phase exponentielle a été légèrement dépassée dîtes moi oui ou non si je dois poursuivre les étapes suivantes de protocole parce que je n'ai pas envie de jeter toute la culture pourrais je me rattrapper Si vous avez un cours sur le clonage envoyez le moi please.  [...] 1) J'ai du mal à voir le lien entre mutation et dégradation d'ADN. Peut être tout simplement un protocole peu efficace. A savoir que les protocoles des kits donnent rarement les résultats espérés, faut souvent adapter en fonction de sa bêbête.  [...]

[Immunologie] Production proteine recombinante et anticorps

Tu peux tenter de fabriquer ta propre protéine recombinante si tu as le matériel et des connaisances en clonage (étape préliminaire). Je l'ai fait moi même car ma protéine n'était produite nulpart. (d'ailleurs une société. G... a voulu récupéré le protocole).  [...] Sinon, les sociétés qui commercialisent des anticorps fournissent aussi des protéines recombinantes (ça sert de contrôle en western blot par exemple). Je te garantis pas la qualité. j'ai déjà acheté un anticorps qui ne reconnaissait même pas la protéine recombinante fournie pas la même société.   [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

pour le protocole de clonage, la première étape est la création d'une banque d'adn (extraction adn, digestion par une enzyme de restriction puis ligation de ces fragments dans des plasmides portant les sites de restrictions de l'enzyme restriction choisie).  [...] Bon, ceci n'est pas vraiment un protocole, juste une ligne directrice. Il manque l'ensemble des étapes de contrôle et des précisions ici ou là.  [...]

[Microbiologie] resistance aux ATB

Avec les nouvelles méthodes de séquençages, c'est plus rapide. Juste besoin d'avoir un clone et de séquencer la totalité de son génome.   [...] Il est bien possible d'isoler et d'amplifier le gène que l'on supconne d'avoir muter via un PCR, cloner ce morceau dans un plasmide receveur (ultra simple), puis de séquencer ce plasmide.   [...]

[Génétique] role des étapes de sous-clonage

je suis désolé pour la question que j'ai posé concernant les principe de chaque étapes du clonage par pGEM.  [...] en fait moi j'aimerais savoir le role du LB, Xgal et IPTG et aussi est ce que toutes les polymérases ajoutent des nucléotides A à la fin de chaque réaction.   [...]

[Biotechnologie] Vecteur d'expression.

Décrivez les étapes (méthode de clonage, nature des amorces, condition d'hybridation, type de vecteur, gène rapporteur etc...) qui vous permettraient de préparer.  [...] un vecteur d'expression comportant 2 régions régulatrices, un promoteur P (200b) et une région amplificatrice E1 (600b) issues de 2 gènes différents. Les extrémités 5' et 3' de P et E1 sont franches et ne peuvent pas être coupées par une enzyme de restriction.   [...]

[Microbiologie] clonage

est ce que quelqu un un connaitrait la technique de clonage LIC et SLIC sa m aiderai bc d avoir un petit résumer ou un protocole merci a tous.  [...]

clonage

voila je ne vois pas pourquoi la mère porteuse ne serait pas l'individu y, et pourquoi prelever seulement le noyau au lieu d'une cellule complète de l'individu x pour le clonage de plus quelle est le role de l'ovule sans noyau, le noyau ne pourrait'il pas se developper sans l'ovule.  [...] C'est pour cela que vous pourrez voir que l'on a cloné des lapins, des chiens, et ce que vous voulez mais pas de singe et encore moins un homme. Et c'est pour cela qu'a mon avis on est pas près d'y arriver. De plus le marquage etant tellement fin, comment être certain que l'on a bien tout nettoyé Ca demande un scannage du génome entier et avant cela de savoir exactement où se situe les marques. Y a là une chose que l'on ne sait pas faire.   [...]

Technique ADN recombinant

1)Ce que je ne comprend pas c'est que une fois que l'adn à été intégré dans le site de clonage sur le plasmide il fait en sorte que la beta-galactosidase n'est pas produite par lacz du moins pas une beta-galactosidase fonctionnelle.  [...] 2) pour le puC19 qui contient un mcs (multiple cloning site) comment se fait-il que le mcs qui consiste donc en des séquences spécifique de nucléotides si j'ai bien compris ne perturbe pas la lacZ vu qu'il est en plein dans le gène si j'observe bien l'image suivante ( je joins l'image).   [...]

[Biologie Moléculaire] stratégie de clonage.

Malgré mon cours d'ingénierie des protéines sur la stratégie de clonage,j'ai beaucoup de mal a me faire une idée claire de la méthode de clonage et de ses différentes étapes sur des adn eucaryotes.Est-ce que quelqu'un pourrait m'expliquer avec ses mots comment cela se passe en général pour des séquences connues,partiellement connues et inconnues.  [...] Merci quand même de m'avoir répondu, je reconnais que ma question est pas très claire mais c'est parce que j'ai un peu de mal a me faire un idée concrète du déroulement du clonage même si je pense avoir plus ou moins compris mon cours, je le relis de plus en plus et ca rentre de mieux en mieux.  [...]