• Forum - étapes, Capacité, Plasmide, Clonage

Augmenter la capacité d'1 plasmide??

Ben, c est un cosmide je pense, dans mon cours on me dis qu on peut augmenter la capacité d un plasmide en faisant d abord un clonage avec un ADN genomique puis...puis je comprends plus rien. c est pour augmenter la quantite d ADN a incorporer...plus on met des sites cos plus on peut y inserer des choses.  [...] .c est avec un phage lamba je pense...on dis qu on peut supprimer des choses pas interressante hors du cosmide formé, mais une fois qu on a des site de clonage et des sites cos, c est bon, non je vois pas trop de dif avec le clonage en fait.  [...]

[Microbiologie] clonage dans un plasmide p gex d'une séquence de génome de mycoplasma meleagridis

s'il vous plaît aidez moi mon encadreur m'a demandé de poursuivre les travaux de recherche de l'étudiante qui a quitté le labo sans laisser des documents sur les tubes qu'elle a laissé j'ai trouvé BL21 INSERT Mycoplasma meleagridis je ne sais ce que je dois faire à l'étape suivante tout ce que je sais c'est qu'elle a cloné un fragment d'ADN DE MYCOPLASMA MELEAGRIDIS dans la souche Ecoli TOP 10 APRèS BL 21.  [...] On peut quand même dire que la première chose à faire devant des plasmides dont le contenu est vaguement connu, voir douteux, est de les séquencer pour déterminer au nucléotide près ce qu'ils contiennent. En gros, reconstituer la documentation qui vous fait défaut.  [...]

[Biologie Moléculaire] comment faire une mutation par PCR?

Enfin, par simple clonage, on insère le résultat de cette pcr dans le plasmide initial grâce aux sites de restriction unique.  [...] La mutagenèse permet d'obtenir un court segment de séquence comprenant la région mutée. Il faut ensuite remettre cette séquence dans le plasmide d'origine, à la place du petit segment non-muté. Le meilleur moyen de le faire c'est par simple clonage grâce à des enzymes de restriction.  [...]

[bio mol] pUC et LacZ

on intègre un fragment d'adn dans ce plasmide pUC. ensuite on l'introduit dans une bactérie et l'importance des sites de réplication du pUC va permettre un clonage important du fragment d'adn souhaité.  [...] Sur le plasmide pUC, on a donc le gène LacZ. Quand on fait le clonage, on va faire en sorte que le gène d'intérêt s'intègre dans le plasmide AU MILIEU du gène LacZ.  [...]

[Génétique] clonage orienté ou non

Par contre, si on réalise un clonage ayant pour but d'exprimer une protéine, l'orientation de notre insert dans le plasmide d'expression sera primordial pour que le couplage transcription/traduction se réalise.  [...] Depuis que je connais cette astuce je n'envisage plus un clonage à partir d'un plasmide sans une étape digestion par DpnI. A connaitre.  [...]

Clonnage du gene de la transfferine

pour construire une banque pour un gène d'intérêt tel que le gène de la transferrine.   [...] quel type de plasmide faut il utiliser (plasmide d'expression ou de clonage).  [...]

Technique ADN recombinant

1)Ce que je ne comprend pas c'est que une fois que l'adn à été intégré dans le site de clonage sur le plasmide il fait en sorte que la beta-galactosidase n'est pas produite par lacz du moins pas une beta-galactosidase fonctionnelle.  [...] 2) pour le puC19 qui contient un mcs (multiple cloning site) comment se fait-il que le mcs qui consiste donc en des séquences spécifique de nucléotides si j'ai bien compris ne perturbe pas la lacZ vu qu'il est en plein dans le gène si j'observe bien l'image suivante ( je joins l'image).   [...]

[Biochimie] Mecanisme de ligation SOS clonage

Ma question du jour, c'est de savoir le mecanisme d'action d'une ADN ligase en général et dans mon cas pour le clonage d'un géne d'interet dans un plasmide (PICZ) qui sont les deux digérés par les mémes enzymes de restriction (SFII et NOTI).  [...] Ceci dit jusque la je compte pas trop sur le clonage avec l insert issue de la digestion du produit PCR parceque j ai des constructions deja faites par des etudiants qui ont passé jadis par le labo à savoir le plasmide PLIP6-P30 et le PET22b(+)- P30 et donc je recupére mon gene d interet qui code pour la P30 à partir de ces constructions.  [...]

[Biochimie] Plasmide de clonage et d'expression

POur ta question sur les plasmides, la seule difference entre un plasmide de clonage et un plasmide d'expression, est que le second possede un promoteur permettant l'expression du gene.  [...] Ces deux types de plasmides ont des caractéristiques communes et des différences. La simple carte de restriction, qui présente les sites de restriction (généralement limitée aux sites présentes une seule fois dans le plasmide) ne suffit pas à les distinguer.  [...]

[Biochimie] Resistance à la zeocine pourquoi ?

j utilise la zeocin pour screener des bactéries transformées par un plasmide PICZ contenant le géne de resistance a cet antibiotique et donc pour controler le clonage.  [...] Ce que je veux dire c'est que dans ton échantillon test, tu as des solutions que tu ne contrôles pas. le tampon dans lequel est ton plasmide, le tampon dans lequel tu le dilue, et d'autres comme les tampons pour ligation... en fonction de ton clonage. Ce n'est évidemment qu'une supposition.  [...]