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extraction phénol chloroforme

quesque tu appeles une miniprep car le protocole de miniprep (autre que par colone) inclu une etape de phenol chloroforme, qui permet de denaturer les proteines et donc de debarasser l'ADN des proteines.  [...] L'extraction phénol ne permet que de laver ton ADN préparé en le débarassant des protéines (jusqu'à un certain point)... reste plus qu'a faire une extraction chloroforme pour enlever le phenol qui est dissout dans la phase acqueuse.  [...]

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En fait, l'étape de purification de l'ADN n'est plus obligatoire, surtout que l'on travaille avec des quantités infimes d'ADN. Le problème de ne pas purifier, c'est que les protéines de la cellule peuvent venir perturber la réaction PCR. D'où l'étape de purification de l'ADN, afin d'enlever un maximum de protéines.  [...] Tolistento, en relisant toutes vos interventions, ( sur les autres fils que vous avez ouverts également) on a vraiment l'impression qu'elles ont un but bien précis et ne sont pas simplement de la curiosité. Lequel, si ce n'est pas trop vous demander Parce que vous auriez sans doute une réponse plus rapide si vous nous disiez ce que vous cherchez à démontrer ou à prouver, plutôt.   [...]

[Biochimie] Trypsine ou Pronase

J'ai un TP de biochimie à faire où on doit purifier de l'ADN et à une certaine étape, on ajoute de la pronase à l'ADN pour briser les peptides en solution. Par la suite, on fait une extraction au phénol/chloroforme pour enlever les protéines et lipides de la solution contenant l'ADN. Alors, j'aimerais savoir.  [...] 1. Si on utilise de la trypsine au lieu de le pronase, cela fait en sorte que les protéines sont hydrolysées en de moins petits fragments. Ma question est. quel impact le fait d'avoir des fragments de protéine plus gros a sur le reste de la purification Est-ce que l'extraction au phénol/chloroforme sera moins efficace Si oui pourquoi.  [...]

[Biologie Moléculaire] lors de la purification de l'ADN plasmidique

je ne suis pas certains d'avoir compris. Si tu fais une lyse alcaline oui il y a une etape de phénol/chlorophorme suivi d'une précipitation de l'ADN.  [...] l'étape de phénol/chloroforme permet de faire précipités les débris cellulaire et les protéines pour s'en débarrasser. Cette étape est généralement suivie d'une étape de chloroforme pure qui permet de ce débarrasser d'éventuelles trace de phénol. Enfin, l'ADN est précipitée par un mélange éthanol 100% + sel, à froid.  [...]

[Biologie Moléculaire] Utilisation de la résine Chelex pour reverse crosslink de l'adn

Je recherche quelqu'un qui utiliserait du Chelex pour reverse crosslink des protéines sur l'adn et qui pourrait m'expliquer comment cela fonctionne.  [...] Le Chelex est un chelateur puissant. Il va chelater les ions positifs ce qui va permettre d'eviter la degradation de l'ADN lors de l'etape 99 deg C / 10min. C'est cette etape de chauffage qui va dissocier les proteines de l'ADN. Chelater les ions va aussi inhiber les DNases.  [...]

isolation d'un plasmide

On tamponne la soude avec de l'acétate de potassium. Les macromolécules (ADN génomique + protéines) peuvent se renaturer. Leur grande taille fait que cette renaturation ne permet pas de retrouver leur conformation native et il se forme un précipité blanc floconneux.  [...] Tout agit avec tout. L'ADN plasmidique, plus petit et plus compact peut retrouver lui sa forme native et reste exclu du précipité. Dés lors, un étape de centrigugation permet de séparer le plasmide (et les petites protéines et des ARNs) restés en solution, du reste précipité au fond du tube.  [...]

monde ARN avant ADN

La démonstration que l'étape clé de la formation de la liaison peptidique au cours de la biosynthèse des protéines est réalisée par catalyse de l'ARN sans intervention quelconque d'un acide aminé confirme l'existence probable d'un monde d'ARN ancestral de même que la découverte des mimivirus à ADN, macrovirus possédant des gènes communs à tous les organismes des trois branches du vivant, eucaryotes, bactéries et archées et qui pourraient être les descendants d'un monde viral ancestral.  [...] , 2002, Gadelle et al., 2003). Il ne reste donc plus que très peu de protéines du métabolisme de l'ADN dont on peut inférer la présence dans l'ancêtre commun de chacun des trois domaines (donc sans doute chez LUCA). En particulier, les protéines de réplication de l'ADN ne sont pas ubiquitaires, puisque l'on distingue deux systèmes non homologues, celui des bactéries et celui des archéobactéries/eucaryotes.  [...]

[Biologie Cellulaire] Télomères et vieillissement

Certaines protéines reconnaissent la séquence télomérique et participent à sa structure. Quand la séquence est devenue trop courte, elles ne peuvent plus se fixer. Cette étape déclenche plusieurs voies de signalisation impliquées dans la reconnaissance des dommages à l'ADN (rôle d'ATM ou de p21 par exemple) et conduit au blocage du cycle cellulaire.  [...] Autre chose, une protéine très importante dans la sénescence est P16INK4A qui est un inhibiteur des CDK/cyclines du point de restriction (CDK4/6 cyclines D). Elle empêche les cellules d'entrer dans le cycle cellulaire, donc favorise la sénescence. Ensuite, ce qui détermine, au niveau du cycle cellulaire, si une cellule est différenciée, quiescente ou en sénescence est le rapport entre P108 et P130 (pour les numéros je ne suis pas sûr à 100%) qui sont des isoformes de pRb et dont le ratio déterminera le destin de la cellule.  [...]

[Biologie Moléculaire] régulation de l'expression du gène

la première étape de l'expression d'un gène consiste en sa transcription à partir de son promoteur, une sequence précisant le début de la transcription et dont l'activité est régulée par des protéines spécifiques de chaque type cellulaire... la transcription s'effectue dans le noyau par une machinerie composée de plusieurs dizaines de facteurs protéiques qui copient la totalité de la séquence d'adn du gène pour donner naissance à un transcrit primaire appelé ARN pré-messager (pré-ARNm).  [...] les séquences contenant l'information génétique à exprimer en protéines, sont séparés par de larges séquences généralement non codantes appelées introns... L'épissage consiste alors l'élimination des introns et à la mise bout à bout des exons et le transcrit mature ainsi formé, nommé ARN messager (ARNm),  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Pour résumer. détruire les cellules (qui ont été lavées dans un tampon) à l'aide d'un détergeant (SDS trouvable dans le commerce), faire une première centrifugation courte pour faire descendre tout les débris cellulaires, prélever le surnageant (où il y a l'ADN et des protéines), puis faire précipiter l'ADN à l'aide d'Ethanol et d'acetate de sodium.  [...] Enfin, pour une PCR ou une digestion par enzyme, l'ADN doit pouvoir être accessible. Donc il ne doit pas être condensé sous forme de chromosome, mais sous forme que j'appelle libre, sans protéines (celle-ci pouvant perturber les réactions enzymatiques), ou le moins possible.  [...]