• Forum - étape, Débris, Protéines

[Biologie Moléculaire] lors de la purification de l'ADN plasmidique

je ne suis pas certains d'avoir compris. Si tu fais une lyse alcaline oui il y a une etape de phénol/chlorophorme suivi d'une précipitation de l'ADN.  [...] l'étape de phénol/chloroforme permet de faire précipités les débris cellulaire et les protéines pour s'en débarrasser. Cette étape est généralement suivie d'une étape de chloroforme pure qui permet de ce débarrasser d'éventuelles trace de phénol. Enfin, l'ADN est précipitée par un mélange éthanol 100% + sel, à froid.  [...]

protocole analyse d'ADN

Voila quelqu'un connaitré le procédé d'extraction de l'ADN pour reconnaitre un suspect (protocol expérimental)Merci d'avance.   [...] de manière général, il faut casser les cellules, éliminer les débris celulaire, par centrifugation. éliminer les ARN, par des RNAses ou par des méthodes chimiques couplées aux autres étapes du protocole. il faut ensuite éliminer les protéines, souvent par un mélange phénol-clhloroforme, puis faire précipiter l'ADN à l'éthanol (en présence de sels) ou isopropanol.  [...]

[Biochimie] Interaction protéine/protéine - ultrasons

Ensuite en fonction de ton tissu, il faut le broyer (dounce par exemple) dans ce tampon, centrifuger pour éliminer les débris et récupérer le surnageant. Tu devrais avoir des protéines natives.  [...] Flyingbike, quand tu dis centrifuger pour éliminer les débris et récupérer le surnageant. Tu devrais avoir des protéines natives., inclus-tu les protéines membranaires Ne vont-elles pas être éliminées en se débarrassant du culot après la centrifugation.  [...]

Extraction d'acides nucléiques

J'aurais voulu connaître succinctement les principes généraux (et pas les protocoles..) des méthodes d'extraction de l'ADN plasmidique, ADN totaux, ADN chromosomique, ARN. Parmis les ARN peut on séparer les ARNr, ARNt et ARNm.   [...] -on se debarasse des protéines, et des membranes (debris cellulaires).  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ARN

J'ai bien compris cela, mais en quoi l'ARN est différent de l'ADN puisque j'ai trois phases au final. la phase organique, rose contenant les protéines, la phase aqueuse contenant l'ARN et au milieu, la phase intermédiaire qui correspond à l'anneau d'ADN.  [...] La phase organique est en bas contient les protéines et les débris, l'anneau blanc à l'interphase ce sont encore des protéines et des lipides, et dans la phase acqueuse il y a TOUS les acides nucléiques.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème : oublié centri sur cellules dans tampon de lyse => WB????

Tu peux toujours centrifuger maintenant pour pouvoir récupérer tes protéines dans le lysat (surnageant) et déposer ensuite (il faudrait peut-être voir s'il faut rajouter du sample buffer ou non).  [...] D'une part la centrifugation n'est pas nescessaire pour récupérer les membranes. elle va simplement descendre les débris cellulaire et les noyaux effectivement. Mais les protéines membranaires seront présentes dans le surnageant.  [...]

[Biologie Cellulaire] isolation des mitochondries

Dans ce cas là, t'as pas besoin de purifier tes mitochondries. Ce qu'il te faut c'est un marqueur spécifique de la mitochondrie. Comme ça tu peux voir si il y a colocalisation entre le marquage de ta protéine et le marquage de tes mitochondries. Tu peux utiliser le Mitotracker (Invitrogen je crois) comme marqueur.  [...] Dans mon protocole, pour l'étape 2 (après s'être débarassé du premier culot contenant les débris cellulaires et noyaux), ils centrifugent à 15000g pdt 5min. Tu récupères ainsi les mitochondries, les peroxysomes et les lysosomes. Ensuite, à toi de jouer pour isoler les mitochondries en utilisant par exemple un marquage immunofluorescent.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction adn phénol/chloroforme

j'aurais besoin de connaitre le role du phénol, du chloroforme et de l'éthanol lors d'une extraction d'ADN. car j'ai l'impression qu'ils font tous la même chose. débarassé l'adn des débris lipidiques et des protéines.  [...] le phenol debarrasse des proteines, le chloropphorme des lipides et l'ethanol permet de precipiter l'ADN (en presence de sels et a froid).  [...]

[Divers] Arsenic

Après plusieurs semaines, suite à l'exposition initiale, l'arsenic s'accumule dans les tissus ectodermes en raison de la forte concentration de protéines contenant du soufre dans ces tissus. L'arsenic, par divers procédés, diminue la respiration cellulaire, ce qui peut conduire à l'hémolyse et à des lésions possibles des reins et du foie, en raison de l'accumulation de débris de globules rouges dans ces organes.  [...] ok merci beaucoup pour vos reponses. Et desole pour le retard de la mienne mais j'avais vraiment beaucoup de travail. J'ai une derniere question je dirais =]. Que provoque une coagulation des proteines dans le corps.  [...]

[Physiologie] le prion

La théorie du prion ou protéine infectieuse, développée par La vache folle, est actuellement la mieux étayée. On peut citer également, les théories d'un virus conventionnel (trop petit pour être détecté actuellement), du virino (petit ARN/ADN masqué par des protéines prion), ou de la molécule auto-chaperonne (capable de modifier sa propre conformation).  [...] Tous les bébés humains reçoivent une certaine protection avant la naissance. Durant la gestation, la mère transmet des anticorps à son fStus à travers le placenta. Ces protéines circulent dans le sang du nourrisson durant quelques semaines à quelques mois après la naissance, neutralisant les microbes ou les marquant pour la destruction par des phagocytes, des cellules immunitaires qui consomment et détruisent les bactéries, les virus et les débris cellulaires.  [...]