• Forum - Enzymes, Vecteur, Entrée

Clonage avec Technologie Gateway

Je tente de réaliser un clonage avec la Technologie Gateway, je voudrais savoir si à partir de cette technologie on peut directement cloner des fragments amplifier par PCR et digérés par des enzymes spécifiques et les tranférés dans un vecteur d'entrée par ligation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Recombinaison LR et interférence ARN

Je sais bien comment ça se passe dans le cas classique, mais le problème là est que le vecteur de destination (en l'occurence pK7GWIWG2D (II), à vos souhaits ) contient deux cassettes Gateway indépendantes (attR1-ccdB-attR2) séparées par un intron. Le but est d'introduire deux fois la séquence du gène d'intérêt en tête-bêche.  [...] Je sais que la réaction LR se fait en une fois, mais je ne vois pas comment ça se passe. est-ce qu'il y a une réaction LR séparée au niveau de chaque cassette, avec deux vecteurs d'entrée.  [...]

Technique Gateway

je n'étais pas sur d'avoir compris l'interet des 2 vecteurs et 2 recombinaisons pour cette technologie, je me demandais pourquoi ne pas utiliser directement le vecteur d'entrée comme vecteur d'expression.  [...] je pense que l'interet du vecteur donneur (qui devient vecteur d entrée après avoir récupéré le gène) est qu'il a tout les gènes permettant l'infection lambda et les gènes accompagnateurs de la recombinaison. Et le vecteur de destination (qui devient d'expression) a les gènes permettant la suexpression du gène d'intéret (promoteur inductible ou costitutif,...).  [...]

[Biochimie] Gateway technology

Si je flanque mon produit de PCR avec des sites attB, là je suis obligée de le recombiner avec un vecteur pDONOR, par contre je peux générer des fragments reconnus par des enzymes de restriction et cloner directement dans un vecteur pENTR, ou encore utiliser un pENTR-TOPO il me semble.  [...] Je tombe sur cette discussion 3 ans après mais la je suis dans la meme situation. Avez vous pu réussir votre clonage En effet je dispose d'un système gateway et j'ai des fragments pcr que j'ai envie d'insérer dans mon vecteur d'entrée pENTR1A, mais la carte de ce vecteur est un peu ambigue pour moi.  [...]

[Biotechnologie] Clonage par Gateway...

Voilà quel est l'intérêt d'avoir différents Gateway reading frame cassettes, c'est à dire différents cadres de lectures des casettes attR1-ccdB-attR2.   [...] soit en phase avec deux codons -AAA-AAA- qui se trouvent sur le si attL1 du vecteur d'entrée, et qu'ainsi les TAG N-terminal de fusion.  [...]

Comment entre l'IPTG dans la bactérie ?

Peut être qu'après transformation avec un vecteur adéquat l'entrée de l'IPTG devient possible car le vecteur apporte avec lui un promoteur constitutif + le gène lac Y.  [...] Je précisais néanmoins dans ma question qu'on remarque que dans un mutant lacY, ne codant pas la lactose permease dont tu parles, l'IPTG entre quand même, ce qui suggèrerait qu'il y a un autre mode d'entrée.  [...]

[Biochimie] Comment le glycerol rejoint la glycolyse ?

je sais que le DHAP et le G3P sont liés par une isomerase et que ca revient finalement au même mais jaimerais avoir tous les intermediaires et le nom des enzymes qui catalysent ces intermediaires. et la encore, selon mes sources ca diverge.  [...] je me suis mal exprimée, excusez moi, en fait je connais bien la glycolyse (toutes les étapes et les enzymes régulatrices) mais ce que j'étudie, c'est l'entrée du glycerol dans la glycolyse.  [...]

[Biologie végétale] MAP kinases

Cette MAPK active de nombreuses protéines comme d'autres enzymes ou des facteurs de transcription qui vont activer la transcription de gènes qui participent à l'entrée dans le cycle cellulaire, par ex les cyclines... Toute une cascade de signalisation quoi.  [...] coucou, merci pour l'information, j'y vois plus clair, en fait je bloquais sur mitogen com je suis plus mycologie que biochimi, je dois réviser tous ça... en tout cas la question était relative au fait que ces mapk etait impliquées dans la pathogénicité de certains champignons vis a vis des plantes, il semblerait qu'elles soient des facteurs qui déclenchent des la production d'autres enzymes de dégradation des parois cellulaire...tout a fait logique, merci beaucoup.  [...]

[Biologie Cellulaire] TPE arsenic comprehension terme technique biologie corps humain

- l'As(III) a une affinité particulière pour les groupements sulfhydriques constitutifs de nombreuses protéines ou enzymes. Ainsi, la principale modification biochimique observée est l'inhibition du complexe pyruvate déshydrogénase. L'arsenic trivalent se lie aux groupements sulfhydriques de la lipoamide, qui est le co-facteur nécessaire à la conversion du pyruvate en acétyl co-enzyme A.  [...] L'arsenic trivalent interfère également avec la production de glucose et son entrée dans la cellule. L'arsenic inhibe l'activité de la pyruvate carboxylase, altérant ainsi la néoglucogénèse. L'arsenic trivalent affecte d'autres enzymes comportant des groupements – SH, notamment impliquées dans le transport trans-membranaire du glucose.  [...]

[Biologie Moléculaire] Site de restriction

J'ai une chose que je comprend pas on choisit une enzyme qui ne coupe pas notre vecteur et qui doit être présente dans le polylinker de notre vecteur.  [...] j'ai trouvé deux enzymes (BamHI et SalI) qui sont présents dans le polylinker de mes deux vecteurs d'expression et qui ne coupent pas mon gènes comment je peux introduire ces deux site dans mes amorces pourque je puisse transférer après mon gène c'est à dire BamHI position 5' ou 3' de mes amorces et comment vérifier que mes amorces sont en phase.  [...]