• Forum - Enzymes, Site, Restriction

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction VS fragment d'ADN

Combien de paires de bases nécessite une enzyme de restriction de part et d'autre de son site de reconnaissance afin qu'elle puisse opérer la coupure du fragment dans les meilleures conditions.  [...] Bonjour, j'aurais une question de novice sur les enzymes de restriction. En quoi le fait d'être un site palindromique du style ATAT rend une séquence vulnérable aux enzymes de restriction.  [...]

[Biochimie] nucléase

Si tu coupes avec deux enzymes différentes, les extrémités générées ne seront pas complémentaires l'une à l'autre puisque les enzymes vont couper différemment (le site de restriction n'est pas le même et le type de coupure non plus).  [...] Admettons voilà ton plasmide ouvert par deux enzymes différentes, une bleue une violette. -PROMOTEUR- site Enzyme de restriction 1 (du vide) site Enzyme de restriction 2 - TERMINATEUR-et on rejoint le promoteur puisque le plasmide est circulaire.  [...]

Besoin que l'on eclaire ma lanterne en Génetique

La RAPD est une technique de PCR permettant d'obtenir une empreinte spécifique à partir d'un génome donné. On utilise pour cela des amorces ayant une faible spécificité (elle s'accrochent à de multiples endroits de l'ADN). Comme tous les génomes sont différents, les sites de fixation des amorces seront variables d'un individu à l'autre.  [...] Je connais moins bien l'AFLP, mais il me semble que c'est la technique utilisée pour les empreintes ADN humaines (par exemple en criminologie). Elle se base sur la restriction du génome, c'est à dire coupure par des enzymes de restriction. On utilise des enzymes ayant un site de restriction assez rare.  [...]

[Biologie Moléculaire] Sites de restrictions proches sur vecteur

Merci IngDr pour ce lien super. J'étais allé sur le site de NEB mais visiblement je n'avais pas assez fouillé...Je vois que les deux enzymes que je veux utiliser clivent à 97% un fragment où une seule base est présente après le site de restriction...donc j'ose espérer que sans base, il y aura suffisamment de coupure.  [...] Les enzymes de restrictions sont des endonucléases. Il faut donc nécessairement au moins une base avant le site de restriction. En principe c'est quand même bien d'avoir 5 ou 6 bases pour que l'enzyme puisse bien s'orienter sur le site de restriction. Cela dit le tableau de IngDr donne que la restriction est faisable dans tes conditions. Essaie.  [...]

[Microbiologie] Taille de plasmide

j-ai les enzyme de restriction BamHI,EcoRI et PstI,COMMENT SAVOIR ESQ CES ENZYMES ONT DES SITES DE RESTRICTIONS POUR LE PLASMIDE pGEM-T ET SI C-EST OUI COMBIEN DE SITE SVP DES REPENCES SONT LES BIENVENUE.  [...] C'est facile pGEM-T est un vecteur de sous-clonage commercial. La carte plasmidique est disponible sur internet. A partir de là un enfant de 6 ans trouverai le nombre de site de restriction pour ces 3 enzymes.  [...]

[Biologie Moléculaire] activite enzymes de restrictions

bonjour j'ai besoin d'aide s'il vous plait pour un exercice sur l'activité des enzymes de restrictions.  [...] afin de réaliser une banque de fragments d'ADNg double brin, on dispose de 20 µg d'ADNg que l'on digère par les enzymes de restrictions BaeGl ou Alul. Chacune de ces enzymes possède une activité de 10U/µL (1U coupe totalement 1µg de plasmide de 3000pb possèdant un site unique de restriction pour l'enzyme de restriction considéré en 1h à 37°C).  [...]

[Génétique] clonage orienté ou non

On digerait alors le plasmide et l'insert par des enzymes différentes A et B générant des sites de restriction non compatibles.  [...] Je suis d'humeur vicieuse aujourd'hui Et comment tu ferais si tu disposais de plusieurs enzymes de restriction, mais tu n'as pas de site de restriction pour la même au sein de l'insert.  [...]

[Biologie Moléculaire] logiciel clonage

Dans enzyme library il y a la liste des sites de restriction des enzymes y compris une extension mais à quoi sert cette extension.  [...] En effet, certains appellent cela le clamp et il permet d' internaliser le site de restriction. En effet, les enzymes de restrictions sont des endonucléases si bien que leur site de coupure doit être à l'intérieur d'une séquence ADN, et non en bordure.  [...]

[Biologie Moléculaire] clonage en phase

Pour amplifier mon fragment OCI, je fais une PCR avec les amorces suivantes (aux quelles j'ai rajouté les sites d'enzymes de restriction car ils étaient absents de l'ORF).  [...] Les enzymes de restriction sont des endonucleases, si vous n'ajoutez pas quelques nucléarises devant votre site de restriction, ça ne coupera pas. Quand je faisais ce type de manip', j'en ajoutais six.  [...]

[Génétique] marche sur chromosome

En pratique, tu sais quelle est la couleur du marqueur des bords. On cherche donc à faire apparaître un site, par hybridation (et reconnaissance par fluorescence par exemple). Si ce site n'a pas été coupé par une enzyme de restriction, il doit apparaître 10 fois (puisque tu as 10 banques).  [...] Puis tu cherches à allumer un second site. Ce site s'allume sur de nouveaux segments mais aussi sur des segments déjà allumés par le précédent marqueur. Ce sont des segments qui se chevauchent (car ils n'ont pas été coupés aux mêmes endroits à cause des différentes enzymes de restriction).  [...]