• Forum - Enzymes, Restriction, Séquences

[Génétique] adn et police scientifique TPE help svp !

3) Donc je pense peut-être qu'on coupe cette séquence de PCR (qui me parait pourtant déjà bien réduite) avec des enzymes de restriction pour ensuite pouvoir procéder à l'electrophorèse. Mais je sais qu'en criminalistique, on ne se sert que des introns (séquence non codante), (pour raisons éthiques) or je croyais que les enzymes de restriction étaient spécifiques aux gênes (or gêne absent sur les séquences non codantes) donc là aussi je bloque.  [...] 3) les enzymes de restriction ne sont pas spécifiques aux gènes mais à des séquences, si la séquence se trouve dans un intron, elle va couper quand même.  [...]

[Biochimie] Enzyme de restriction

Je voulais avoir une petite précision sur les enzymes de restriction. Dans mon exercice j'ai un tableau avec différentes enzymes de restriction et les séquences clivées correspondant a chaque enzyme. Cela veut dire que si j'ai par exemple pour une enzyme X, la sequence clivee.  [...] Tout dépend de ton enzyme de restriction. Il en existe de toutes sortes, celles qui reconnaissent une séquence et qui coupe 100 nucléotides plus loin, celles qui vont couper à l'intérieur de la séquence de reconnaissance, celles qui vont avoir besoin de 2 séquences de reconnaissances mais n'en couper qu'une, ou même encore ailleurs, etc.  [...]

digestion enzymatique

Il existe des enzymes qui peuvent, de la même façon que les endonucléases (enzymes de restriction) le font sur les acides nucléiques, couper des séquences AA en des positions spécifiques qui dépendent de certaines propriétés d'une séquence en un endroit précis (pI, certains AA précis, etc.).  [...] Il faudrait que tu trouves la séquence de ta protéine, repère les endroits ou il faut couper et vérifie si certaines de ces enzymes (ou d'autres) sont susceptibles de cliver là ou tu en aurais besoin.  [...]

[Biologie Moléculaire] stratégie de clonage.

Malgré mon cours d'ingénierie des protéines sur la stratégie de clonage,j'ai beaucoup de mal a me faire une idée claire de la méthode de clonage et de ses différentes étapes sur des adn eucaryotes.Est-ce que quelqu'un pourrait m'expliquer avec ses mots comment cela se passe en général pour des séquences connues,partiellement connues et inconnues.  [...] Je ne comprends pas trop comment choisir les amorces sens et anti sens,trouver la phase ouverte de lecture et les enzymes de restriction.  [...]

Enzymes de restriction

Bonsoir, lorsque l'on veut étudier les ARN ribosomaux, ou d'autres séquences, pourquoi utilise t-on plusieurs enzymes de restrictions Je sais que chaque enzyme a un site de restriction spécifique mais je n'arrive pas à comprendre l'utilité de cette technique.  [...] On étudie l'ADN 16s par PCR, puis électrophorèses des fragments d'ADN obtenus grâce aux enzymes. On a alors les résultats de l'électrophorèse (pour une bactérie) avec différentes enzymes de restrictions. Puis on nous demande l'intérêt de la technique puis pourquoi il est intéressant d'en utiliser plusieurs.  [...]

[Biologie Moléculaire] marqueurs moléculaires

Alors évidemment dans la pratique on se sert d'enzymes de restriction pour utiliser ces outils mais à la base il s'agit de séquences génomiques.  [...] Je ne parlais pas des enzymes de restriction mais des marqueurs biochimiques en tant que tel. On dose par exemple le taux de certaines enzymes ou d'autres molécules qui sont associées à telle ou telle maladie.  [...]

[Biochimie] Preparation et analyse de plasmides

* Les enzymes que tu cites, HindIII et EcoRI, sont appelées enzymes de restriction. Elles vont reconnaître des endroits particuliers au sein de l'ADN. des sites de restriction (des séquences palindromes, il y a une discussion dessus, si je ne m'abuse, donc regarde ).  [...] La carte circulaire comme tu dis (= la carte de restriction) se fait après l'électrophorèse. Tu ne peux pas prédire le nombre de fragments que tu auras (à part si tu connais la séquence complète de ton plasmide).  [...]

[Microbiologie] Hybridation

Après, si l'expérience est un Southern-Blot (ou équivalent), la fréquence de coupure de l'ADN par l'enzyme doit être assez élevé pour que le profil de digestion soit lisse. Dans mon ancien labo, on utilisait des enzymes classique de type EcoRV, HindIII... Le point difficile étant que la zone de référence (pour toi le 16s) et la zone à tester (le gène de résistance) doivent toujours être détecté (et donc qu'il ne faut pas couper au niveau de la sonde - qui n'est généralement pas excessivement grande -500pb pour moi).  [...] Homing endonucleases do not have stringently-defined recognition sequences in the way that restriction enzymes do. That is, single base changes do not abolish cleavage but reduce its efficiency to variable extents. The precise boundary of required bases is generally not known.  [...]

[Biochimie] Enzymes de restriction pour détecter les mutations

Il faut prendre en compte toute la séquence reconnue par les enzymes de restriction. à part l'enzyme 4, les autres possèdent des séquences que l'on ne retrouve pas dans le gène, ni normal ni muté.  [...] enz5. GAGCTC, il y a bien un site de restriction de l'enzyme 5 dans les 2 séquences, mais pas au niveau de la mutation, donc elle ne sert à rien ici.  [...]

[Génétique] Questions à propos de la thérapie génique

Ce document parle aussi de gènes de sélection qui contiennnent des sites de restriction () mais je ne pense pas que ce soit de notre niveau.  [...] Concernant les sites de restriction, ce sont des séquences d'ADN double brin qui sont reconnues et clivées par des enzymes bactériennes.  [...]