• Forum - Enzyme, Restriction, Fragments, ADN

[Biologie Moléculaire] marqueurs moleculaires

Alors dire polymorphisme RFLP c'est redondant car dans RFLP il ya déjà écrit polymorphisme (Restriction fragment length polymorphism=Polymorphisme de longueur des fragments de restriction).  [...] De l'ADN est coupé en fragments par une enzyme de restriction, cette dernière coupant l'ADN au niveau d'une séquence qui lui est spécifique (site de restriction). Les fragments d'ADN ainsi obtenus, nommés fragments de restriction, sont ensuite séparés selon leur longueur par électrophorèse sur gel d'agarose, on obtient un profil.  [...]

[Biochimie] enzyme de digestion-restriction

On parle d'enzyme de restriction. Elle reconnaît spécifiquement des séquences d'ADN appelés site de restriction et induit une digestion de l'ADN.  [...] En PFGE, on peut parler d'enzyme de macro-restriction puisqu'elle génère des macro-fragments d'ADN (de + de 50 kb) résolus par électrophorèse en champs pulsé.  [...]

[Génétique] marche sur chromosome

On utilise donc des banques d'ADN. La banque d'ADN, c'est de l'ADN double brin digéré en fragments irréguliers par une enzyme de restriction. Mais les fragments sont mélangés, ils ne sont plus dans l'ordre initial.  [...] Puis tu cherches à allumer un second site. Ce site s'allume sur de nouveaux segments mais aussi sur des segments déjà allumés par le précédent marqueur. Ce sont des segments qui se chevauchent (car ils n'ont pas été coupés aux mêmes endroits à cause des différentes enzymes de restriction).  [...]

[Biochimie] génétique - endonucléases de restriction

Un ADN génomique contenant 40% de guanine est hydrolysé par une enzyme de restriction reconnaissant le palindrome AATT. Quelle est la taille moyenne des fragments générés par l'hydrolyse enzymatique.  [...] Donc la probabilité de trouver un site est (1/4) n avec n la taille du site de restriction. Ce genre de calcul vous amène à conclure qu'une enzyme telle que EcoRI génère des fragments de 4096 pb en moyenne.  [...]

Mémoire en génétique : questions diverses

Ces derniers jours, j'étudie les empreintes génétiques, notamment le polymorphisme de l'ADN, les SNP et les séquences répétées en tandem. Je souhaite parler du polymorphisme de longueur des fragments de restriction, mais j'ai beau faire des recherches, je ne comprends absolument pas de quoi il s'agit.  [...] Après de nombreuses recherches, voilà ce que j'ai compris. les enzymes de restriction ont la faculté de couper la molécule d'ADN à des endroits spécifiques. Par exemple, une enzyme va couper entre G et A, c'est le site de restriction. Si on prend deux fragments de molécule d'ADN de deux individus différents.  [...]

[Biologie Moléculaire] La génomique structurale !

Après, on passe à la carte physique qu'elle consiste d'abord à détérminer également la distance entre les locus en paire de base et puis à cloner tous le génome sous formes de séquence chevauchants par utilisations d'enzymes de restriction... Mais pk cloner tous le génome tandis que, ce que nous intéresse c'est qu'un seul gène.  [...] Ils ont donc coupé, puis cloné chaque fragments de l'ADN humain (en usant à la fois d'enzyme de restriction et de séquences chevauchantes) dans des vecteurs d'expression standardisé, qu'ils ont fait séquencé (si je me souviens bien, à l'époque, il fallait faire une 20 de run -pas sur du chiffre, si quelqu'un peut confirmer- pour être un peu près sûr du séquençage des 500 premières paires de bases).  [...]

La PCR fragments d’adn

Tu concentres, et tu fais ta PCR. Il peut être bon de couper l'ADN préalablement par une enzyme de restriction pour avoir des fragments plus courts avant la PCR.  [...] Vous avez bien compris la chronologie des événements. PCR puis électrophorèse. Mais vous ne mentionnez pas les enzymes de restriction alors que c'est le plus important, c'est cette coupure par les enzymes de restriction de l'ADN non codant précédemment amplifié en PCR qui va permettre de donner des profils différents, qui seront ensuite révélés sur le gel après électrophorèse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de construction d'une banque d'ADNc

Je tiens à vous dire que pour digérer mes fragments j'utilise l'enzyme de restriction Sfi I et ce à 50°C pendant 2h.  [...] La vérification du clivage des ADNc par une enzyme de restriction peut se faire si le clivage génère des fragments de taille différente et suffisamment longs. Ainsi par migration sur gel d'agarose, la présence des bandes d'intérêt permet de valider le clivage.  [...]

[Biologie Moléculaire] Connaitre séquence génomique....

digestion de restriction avec plusieurs enzymes dont les séquences ne reviennent pas trop souvent (digestions simples et doubles histoire d'avoir les fragments avec plusieurs origines et fins différentes.). Tu as une idée de la complexité du génome (tu peux faire des essais pour voir la taille moyenne des fragments que tu rammènes). Tu fais une banque avec tout cela.  [...] Pour la PCR inverse, il peut être intéressant d'utiliser une 2eme enzyme de restriction située entre les 2 amorces, de manière à relinéariser le brin d'ADN circulaire. Cela facilite la PCR sur des petits fragments.  [...]

[Biologie Moléculaire] Polymorphisme et RFLP

Par exemple, les RFLP sont des polymorphisme de longueur des fragments de restriction... c'est donc juste la variabilité de longueur de fragment d'ADN après digestion enzymatique Rien de plus complexe.  [...] La méthode des enzymes de restriction (plus tellement employée je pense) n'est qu'un révélateur de mutations dans le gène étudié.  [...]