• Forum - Enzyme, Restriction, Fragment

[Génétique] Principe de la technique RFLP

SVP si quelqu'un pourrai m'expliquer le principe de la technique RFLP ( le polymorphisme de longueur des fragments de restriction de l'ADN ), et comment il sert à l'etablissement des caryotypes ainsi que la detection de certaines maladies génétiques.  [...] Bon tout d'abord un fragment de restriction est un morceau de DNA qui a été coupé par un enzyme de restriction (enzyme coupant le DNA).  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

on met les différents fragment dans un plasmide, et c'est là que rentre en jeu les enzymes de restriction, donc quand on dit que le plasmide a un site de restriction BamH1 cela veut dire que c'est cette enzyme BamH1 qui va cliver un bout du fragment du gène.  [...] on met (on insert) les différents fragment dans un plasmide, et c'est là que rentre en jeu les enzymes de restriction, donc quand on dit que le plasmide a un site de restriction BamH1 cela veut dire que c'est cette enzyme BamH1 qui va cliver un bout du fragment du gène.  [...]

[Biochimie] RFLP, SNP et compagnie !

Si la mutation présente dans la maladie modifie également un fragment de restriction, en analysant les différents fragments obtenus après digestion par l'enzyme de restriction, vous pouvez d'une part savoir si l'individu a son site de restriction muté et d'autre part si il est hétérozygote ou homozygote pour le gène en question.  [...] Oui exact, autant pour moi. J'ai écrit trop vite ma réponse... ^^. Mais pour une étude d'un gène ou maladie on utilisera plus fréquement les SNP qui forment un RFLP non Comme ça, après avec PCR on peut facilement étudier ces polymorphisme et savoir si ils sont hétérozygote ou non pour un individu.   [...]

[Génétique] hybridation adn/adn : technique de southern blot

Si tes bandes ne descendent pas, c'est peut être aussi parce que tes fragments sont trop gros. Il faudrait essayer un gel moins concentré.  [...] Donc dans ce cas, le fragment d'ADN visible au puit 4 à déjà été digéré. puisqu'en regardant ma carte de restriction, je constate que EcoRI permet d'obtenir un fragment de 21 226 pb. Pourtant mon puit 4 ne contient pas d'enzyme, donc pas de digestion possible.  [...]

Sos....rflp

restriction. La coupure est alors détectée par Southern ou par coupure d'un fragment de PCR.  [...] RFLP sont les initiales de restriction fragment length PCR. C'est une technique qui consiste à amplifier un fragment d'ADN par PCR, puis de le soumettre à l'action d'une enzyme de restriction qui va couper les fragments amplifiés. Selon la présence et la position des sites de restriction, des amplicons qui semblaient identiques à première vue peuvent se révéler différents.  [...]

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction VS fragment d'ADN

Combien de paires de bases nécessite une enzyme de restriction de part et d'autre de son site de reconnaissance afin qu'elle puisse opérer la coupure du fragment dans les meilleures conditions.  [...] Bonjour, j'aurais une question de novice sur les enzymes de restriction. En quoi le fait d'être un site palindromique du style ATAT rend une séquence vulnérable aux enzymes de restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène0 AOX1!!

1) Enzyme de restriction spécifique à AOX1 ainsi qu'au plasmide vecteur de clonage. Donc découpage des deux au bon endroit.  [...] 2) Insertion du promoteur dans le plasmide et reapariment de base car notre enzyme de restriction est spécifique et a couper notre fragment au bon endroit.  [...]

ADN de séquence inconnue, choix des enzymes de restriction.

Si j'ai un fragment inconnu j'aurais tendance à ne pas essayer de couper mais à utiliser la Klenow ou la TNK4 pour rendre les extrémités du fragment franches. Du coup, j'ouvre le vecteur avec une enzyme de restriction qui génère des extrémités franches, et dont le site de restriction se trouve dans la cassette de clonage, et je ligue.  [...] Grosso modo, vous avez un fragment d'ADN que vous souhaitez faire rentrer dans un plasmide. Vous ne savez pas comment il a été obtenu, vous ne connaissez pas son état. Pour le faire entrer dans un plasmide, il va vous falloir ouvrir le plasmide en utilisant une enzyme de restriction dont il existe deux types.  [...]

Technique : RFLP

L'objectif de la RFLP (Restriction FRagment Lenght Polymorphism pour Polymorphisme de longueur des fragments de restriction) est de mettre en évidence des variances alléliques.  [...] je pense comme toi, s'il y a présence de sites de restriction, les fragments obtenus seront plus courts que si les sites sont absents, puisque s'il n'y a aucun site de restriction spécifique à l'enzyme de restriction, le fragment reste entier et donc sa longueur est maximale.  [...]

[Biochimie] Pcr

Bonjour, je révise la pcr mais je ne comprends pas une fois la pcr effectuée et le fragment voulu sélectionné. On en fait quoi Enzyme de restriction puis migration Séquençage.  [...] * Si ta mutation est associé à un polymorphisme, type RFLP par exemple, tu peux extraire sur gel ton produit de PCR, digérer, et regarder le profil de restriction obtenus.  [...]