• Forum - Enzyme, Restriction, Coupe

[Biologie Moléculaire] enzyme de restriction

je cherche une enzyme de restriction qui coupe entre un TTGTAC.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dominant négatif

Alors en fait si j'ai bien compris c'est au niveau génétique que ça se passe, on va modifier le gène de cette protéine de sorte que toutes les protéines produites seront non fonctionnelles donc on peut apparenter ça a un KO mais comment fait on cette manipulation concrétement j'ai une lignée cellulaire qui surexprime une protéine et je veux l'inhiber pour en étudier les effets quelle est la marche à suivre au point de vue technique.   [...] puis chisir une enzyme de réstriction qui coupe de part et d'autre des extrimités de ce gène.  [...]

[bio mol] hélicase

l'experience consiste a mettre l'hélicase et l'enzyme de restriction et on ne devrait plus avoir qu'une bande (car l'enzyme ne peut pas coupé de facon simple brin).  [...] Mais rien ne dit que l'hélicase agira avant l'enzyme de restriction.mais a la rigeur ce ne serrai pas tres grave, on aurait trois bande dans ce.  [...]

[Biologie Moléculaire] ensyme de restriction

SVP je cherche à savoir les enzyme de restriction qui peuvent dégrader mes microsatellites déjà connu.  [...] est ce qu'il existe un site ou une méthode qui nous permettre de connaitre les enzyme de restriction qui coupe une séquence connu.  [...]

[Génétique] marche sur chromosome

En pratique, tu sais quelle est la couleur du marqueur des bords. On cherche donc à faire apparaître un site, par hybridation (et reconnaissance par fluorescence par exemple). Si ce site n'a pas été coupé par une enzyme de restriction, il doit apparaître 10 fois (puisque tu as 10 banques).  [...] Une fois qu'on connaît tout l'enchaînement du grand segment entre les 2 gènes marqueurs (donc ici entre noir et rouge), on cherche des séquences connues (genre TATAbox, promoteurs...) pour repérer les possibles gènes, leurs exons et leurs introns. En fonction de la séquence du gène ainsi découvert, on imagine la tête que pourrait avoir la protéine qu'il code.   [...]

[Biologie Moléculaire] PCR colonie et PCR ADN

Quand tu dis que le plasmide est présent seul dans la miniprep, sais tu si il est sous forme linéaire ou circularisé par la ligation. (Une digestion avec une seule enzyme devrait donner 2 fragments si il est linéaire). Imaginons que la ligation ne fasse que circulariser le plasmide sans introduire l'insert, ça pourrait conférer la résistance et la PCR positive proviendrait de l'insert qui est transformé en même temps.  [...] -Une enzyme de restriction ne coupe pas et j'ai donc des plasmides refermés avec des inserts dans mes colonies ce qui fait que je peux amplifier l'insert, et que je le perd ensuite.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment ajouter un petide signal à une proteine?

Mais deux seulement suffisent. La premiere, qui amplifie le peptide signal, avec sur une des amorces un site de restriction (cohesif), que tu rajouteras egalement sur le sequence de la CFP de la meme maniere (sauf bien sur si c'est une CFP commercial, avec deja un bon choix d'enzyme qui coupe ou il faut).  [...] Tu peux ensuite purifier tes fragments, les digerer, les repurifier puis faire le clonage (transformation, amplification, verification) et hop, le tour est joue. Durer moyenne pour un tel clonage. une semaine max, sans compter le temps necessaire pour commander les amorces.   [...]

[Biologie Moléculaire] Séquence du promoteur du gène résistance à l'ampicilline

J'aimerais savoir où trouver la séquence du promoteur de ce gène. C'est pour savoir si le site de restriction que j'ai choisi n'est pas trop près du promoteur.  [...] Je dois faire une restriction avec une enzyme et il ne faudrait pas que ça me coupe le promoteur. Je dois vérifier que l'enzyme est assez en amont du promoteur.  [...]

[Génétique] pb clonage moléculaire

Une masse moléculaire peu élevée des plasmides car, ils sont faciles à manipuler, ils sont présents en beaucoup d'exemplaire ce qui facilite leurs isolement, mais surtout amplifier l'expression de tout les gène qui y sont clonés. En plus leur taille augmente la probabilité d'y trouver des sites de restriction unique.  [...] Un site unique pour une série d'endonucléases de restriction, localisé de préférence dans des gènes dont l'expression phénotypique est facilement.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Et pareil pour les enzymes de restriction, du fait quelles sectionnent l'ADN en des lieux spécifiques ont sait lesquels seront coupés.  [...] Généralement, lorsque l'on utilise une enzyme de restriction commune, on ne parle pas d'où elle coupe (car elle peut aussi des fois ce tromper) mais à quelle fréquences elle coupe en moyenne. Tout les 200pb Ou toute les 4000pb C'est surtout ceci qui est regardé.  [...]