• Forum - Enzyme, Restriction, Clonage

calcul dilution plasmide

merci a toi donc v c est m/c maisla concentration est en ng donc converti en ug 5/0.043 c est 116 ul je pense que c est beaucoup vous aussi que ce que vous me conseiller de changer carrément le protocole en prenant 205ug de vecteur.   [...] c est pour la digestion d un plasmide avec enzyme de restriction pour faire un clonage.  [...]

[Biologie Moléculaire] PB ADN dans le puit d'agarose

Je viens de commencer un nouvel emploi en labo, dans lequel la thématique est basée sur des techniques de clonage que je n'ai jamais fait auparavant.  [...] Je commence mon 1 er clonage, donc pour faire court j'ai coupé mon vecteur avec une enzyme de restriction ApaI, qui devrait le linéariser.  [...]

[Génétique] Clonage animal (question)

Pour le clonage thérapeutique, là, oui, il va falloir des enzymes de restriction et des plasmides pour sélectionner des gènes, les cloner, les introduire dans une cellule hôte, etc.  [...] Pour moi, à partir du moment où on parle de clonage (tout court) il n'y a pas d'utilisation d'enzyme de restriction. la technique de clonage, qu'il soit reproductif ou thérapeutique, est de transférer directement un noyau d'une cellule quelconque dans un ovule.  [...]

clonage fou!

Un clonage a priori classique me donne du fil à retordre et peut-être avez-vous déjà eu des soucis avec l'enzyme de restriction SalI.  [...] Sachant que j'ai fait ce clonage à l'identique pour un autre insert et que j'ai le même problème, est-ce que c'est statistiquement possible que le même site de restriction saute deux fois.  [...]

[bio mol] pUC et LacZ

le plasmide pUC possède une zone portant un nombre important d'initiateur au clonage. Si j'ai compris lorsque qu'il y a qu'un seul site de restriction, l'insertion de l'insert ne se fait pas forcement à l'endroit souhaité c'est à dire au plus près de ce site.  [...] Pour cloner, on ouvre le site de clonage avec une enzyme de restriction qui lui est spécifique. L'insert est également digérée avec la même enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] séquençage ADN

Note bien qu'il existe d'autres boites qui produisent des plasmides équivalents moins cher. Donc je te donne celui ci pour que tu vois ce que c'est mais vois en fonction de ce que tu as comme contacts avec les fournisseurs. Tu verras que page 9 il y a la séquence de la cassette de clonage avec PR (M13 reverse) et PU (M13 -20 et M13 - 40.  [...] Au début du message je signalais que ces plasmides de TA cloning dérivaient du pUC. Ils sont optimisés pour améliorer le rendement du clonage des fragments de PCR. Du coup en ouvrant un pUC tout bête avec une enzyme de réstriction qui génère un fragment à extrémités franches tu devrais pouvoir cloner tes PCR mais le rendement ne sera peut être pas très bon.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de ligation??

Je viens de repenser à un de mes sous-clonages qui avait eu du mal à marcher. J'étais arrivé à savoir que mes inserts était bien clivés, de part et d'autres par la même enzyme de restriction car après clivage et ligation, sur mon gel d'agarose j'avais un profil en échelle.  [...] une bande à 800 pb (insert), à 1600 (dimère d'insert), 2400 pb (trimère),...Cela montre que l'insert se ligue à lui-même grâce au fait qu'il soit clivé par la même enzyme de restriction à chacune de ses extrémités. Pour un clonage orienté, je doute que cette vérification soit aussi évidente.  [...]

[Génétique] clonage orienté ou non

Concernant les différents types de clonages, celà dépend effectivement de la stratégie adopter pour le clonage via le choix des enzymes de restriction.  [...] En fait, ma question était de savoir comment faire si l'enzyme B (pour reprendre la nomenclature ci-dessus) n'a pas de site de restriction au sein de la séquence de l'insert.  [...]

fusion transcriptionnelle et traductionnelle

ma question parait simple. quelle est la différence entre une fusion transcriptionnelle et une fusion traductionnelle je ne suis pas certain de la réponse.   [...] les 2 types de fusions peuvent se réaliser par PCR ou par clonage classique avec enzymes de restriction,  [...]

Purification Séphacryl S-400

Cela fait quelques années que je purifie mes produits de PCR à l'aide d'une petite colonne en séphacryl S-400 (fabrication maison.), en vue de les sous-cloner dans des plasmides d'entrée pour du clonage GatewayTM, entre autre.  [...] J'aurais voulu savoir si le séphacryl S-400 permettait d'éliminer efficacement la Taq pol, car actuellement je voudrais faire du clonage par restriction/ligation. Je sais que la taq pol peut être gênante après digestion des fragments PCR par des enzymes de restriction, puisque les résidus de Taq pol viendraient potentiellement compléter les extrémités collantes.  [...]