• Forum - Enzyme, Régulation, Plasmide, Origine, Réplication, Cellule

origine de réplication

Bonjour à tous, lorsqu'on modifie génétiquement une cellule en lui injectant un plasmide, des fois on dit que le plasmide a une origine de réplication qui fonctionne dans une cellule et pas dans un autre organisme.  [...] ça veut dire quoi en faite pour moi l'origine de réplication c'était quand les 2 brins d'ADN se détachent et qu'on commence la réplication... est ce que quelqu'un peut m'aider merci d'avance.  [...]

[Biologie Moléculaire] conversion d'un plasmide

J'aimerai savoir si il était possible d'ajouter une origine de réplication et tout de suite après un marqueur de sélection afin de pouvoir sélectionner des clones.  [...] tu peux songer a foutre une origine de réplication virale type SV40 par contre je sais ce que ca donne en système de production.  [...]

[Biochimie] Clonage vecteur navette sur la levure

En fait, le passage en bactérie te sert à amplifier la quantité de plasmides, pour être certain que, lors de ta transformation, de l'ADN entrera effectivement dans la cellule.  [...] Dans le cas du plasmide, tu peux vouloir, ou non l'intégrer au génome ou bien le laisser autonome dans la cellule s'il dispose de sa propre origine de réplication.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage dans plasmide

Si ce n'est pas le cas, est-ce que ceci est du au fait que certains génes ne sont actifs que si leurs sites de regulation sont occupés Si ces sites de regulation ne sont pas également intégrés dans le plasmide, le géne ne s'exprimera pas dans la cellule hôte.  [...] Sinon pourquoi un plasmide linéaire ne sera jamais transcrit par la cellule Est-ce que c'est lié à l'origine de replication du plasmide.  [...]

[Biotechnologie] Clonage Eucaryote

Voilà, j'ai ecrit que pour la production de protéines dans des cellules de mammifères, il fallait utiliser un plasmide contenant un site polyA, une origine de réplication virale ainsi qu'un promoteur de type viral.  [...] Oui mais pour utiliser un plasmide dans une cellule de mammifères, faut il alors qu'il y a ait une origine de réplication de type virale ainsi qu'un promoteur type viral.  [...]

[Biologie Cellulaire] Vecteur d'expression transitoire

Oui il y a expression de ton plasmide sans séquence Ori car cette séquence est nécessaire pour la réplication du plasmide et c'est une origine de réplication procaryote lorsqu'on fait des expressions transitoires car on produit les plasmides chez E. coli. Pour initier la transcription on utilise la plupart du temps le promoteur fort du cytomégalovirus (CMV) que l'on place en amont de la séquence codante.  [...] Et dernière chose, pour la production des plasmides dans des bactéries, il ne faut pas qu'une origine de réplication procaryote (Ori) mais aussi des séquence codant un ou plusieurs gènes de résistance à des antibiotiques (habituellement 2) pour sélectionner les bactéries qui ont intégré le plasmide dans un milieu de culture contenant les antibiotiques.  [...]

[Biologie Moléculaire] Décision de replication de l'ADN

Il y a deux cas possibles. soit le plasmide contient une origine de réplication reconnue par la machinerie de la Levure et dans ce cas on aura une prolifération des cellules l'ayant, soit le plasmide n'en contient pas et les cellules ne survivront pas.  [...] En s'appuyant sur ces informations, on a démontré ces topologies au niveau des ARS portées par différents plasmides (Brewer et al., Cell, 1987) et on a établi que les ARS sont bien des origines de réplication. (Je passe très vite ici pour deux raisons. 1.  [...]

[Biologie Cellulaire] Clone du gène CRO d'un bacteriophage

En fait, on souhaite cloner le gène CRO du'un bacteriophage lambda dans un plasmide pLV236 et on me donne comme carte de restriction.  [...] Je ne vois pas quelle(s) enzymes(s) de restriction je dois utiliser pour le clonage de CRO, sachant que dans mon plasmide est deja present un P/O lac, une origine de replication, LacI et AmpR.  [...]

[Biologie Moléculaire] siRNA, shRNA ??

Bien sûr mais la pression de sélection ne permet que de sélectionner les plasmides intégrés et les plasmides épisomaux répliqués. Dans ce dernier cas, il leur faut une origine de réplication exploitable par la cellule transfectée, comme par exemple un plasmide contenant l'origine de SV40 avec les cellules COS-7 qui possèdent l'antigène T nécessaire pour répliquer les plasmides contenant cette origine.  [...] Oui je rejoins LXR sur ce point, en dehors du cas bien particulier des vecteurs épisomaux, la pression de sélection va permettre de selectionner les cellules qui ont intégré le plasmide, sinon celui-ci est perdu au fur et à mesure des divisions cellulaires.  [...]

Carte plasmide pcDNA 3.1

Je sais que les ori servent à initier la réplication, mais je croyais qu'un plasmide se répliquait d'un seul coup et toujours à partir du même endroit, donc pourquoi il y a 3 ori différentes (SV40ori, pUCori, f1ori) Et SV40pA qu'est ce que c'est.  [...] SV40ori sert d'origine de réplication dans certaines cellules eucaryotes, c'est-à-dire que si on l'insert dans E.coli il ne va pas s'exprimer Mais si le plasmide doit se répliquer dans une bactérie la réplication va commencer à pUCori ou f1ori Je ne comprends pas pourquoi il y a plusieurs origines.  [...]