• Forum - Enzyme, Fragment, ADN

[Biologie Moléculaire] ADN polymérase à activité exo3'-5'

Les ADN topoïsomérases (de type I. ADN topo-isomérases et de type II. ADN gyrases) sont des enzymes qui contrôlent la structure topologique de l'ADN en générant des coupures transitoires dans celui-ci et en catalysant le passage des segments d'ADN à travers ces coupures avant de les refermer.  [...] L'ADN polymérase I qui est extraite d' E.coli possède deux propriétés exonucléasiques. (5' à 3') et (3' à 5'). Cependant on utilise souvent une enzyme préparée à partir de l'ADN polymérase I qui est appelée fragment de KLENOW et qui ne posséde que l'activité exonucléasique 3' à 5'.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

sur ce genre de manip c'est souvent la digestion du produit de PCR qui s'effectue mal. en effet les enzyme ont des difficulté pour coupes aux extremites un fragment d'ADN linéaire.  [...] Le coup du gel est vraiment à n'utiliser que lorsque l'on obtient plusieurs fragments qui peuvent religuer et que l'on ne peut pas ciper. Et encore même là... Recemment je m'y suis risqué. Ca n'a rien donné et j'ai encore préféré screener mes clones plutôt que de persévérer dans cette voie du découpage de bandes.  [...]

ADN polymérase et ligase

Oui je disais c'est le même car on garde le principe de copier de l'ADN ou de l'ARN. Seulement que comme tu le dis très bien, pour la transcription il n'y a pas de fragments d'Okasaki et pas d'ARN dans la réplication. C'est très juste, mais dans les deux cas, une enzyme va s'amuser à copier le brin, dans le cas de la réplication c'est les fragments d'Okasaki pour un sens et dans l'autre c'est l'ADN polymérase, enfin c'est le système classique.  [...] Pour le cas de la transcription, il y a aussi une polymérase mais spécifique à la transcription. Une enzyme qui synthétise un fragment d'ARN monobrin et pas un double brin d'ADN. Mais le principe reste le même par le fait que dans les deux cas c'est une enzyme qui photocopie le brin de base.  [...]

[Biochimie] Différence entre puce à ADN et sonde à ADN !

Une sonde à ADN est un fragment de nucléotides marqué (par un composé fluorescent, un radio-isotope ou une enzyme) que l'on utilise pour hybrider et détecter des séquences homologues, c'est-à-dire complémentaires.  [...] Une puce à ADN est un ensemble de sondes à ADN fixées en rangées ordonnées sur une petite surface.  [...]

[Biologie Moléculaire] enzyme de restriction

est il possible d insérer un fragment d adn dans un plasmide linéarisé par une enzyme de restriction non palindromique.  [...] Oui c'est possible, à condition d'insérer un fragment d'ADN à extrémités cohésives.  [...]

[Biochimie] Enzyme de restriction

-celle qui vont couper en cohesive ends et laisser à chaque fragment un morceau d'ADN monocaténaire. de retour à l'exemple, disons que l'enzyme coupe entre le G et le C en position 1 et 2. On marque normalement ça comme ça. 3'-G. CATGC-5'.  [...] Je dirais plutôt que l'enzyme de restriction va cliver à l'intérieur de cette séquence et générer ainsi 2 fragments soit à bouts francs soit cohésifs. Elle peut cliver en plein milieu ou après un nucléotide ou trois nucléotides, tout dépend de l'enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Réparation mutation, structure Holliday

Ce court fragment est perdu, et c'est là que la RecA intervient, elle va incorporer le fragment d'ADN manquant à partir du brin d'ADN parentale, puis il y'a l'intervention d'une autre enzyme d'excision-resynthése qui va éliminer l'erreur et comblé la lacune au niveau du brin parentale.  [...] Lors de l'analyse des allèles dans une famille dans laquelle on cherche la présence d'un fragment connu, On peut utiliser 2 techniques. RFLP ou Carte de restriction, bien que je les connaisse en gros, je ne comprends pas bien pourquoi ce serait plus rapide (ou simple) avec les enzymes de restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Construction Banque ADNc

On peut faire un traitement au NaOH, qui détruit l'ARNm et on utilise une ADN polymérase pour avoir le 2e brin d'ADNc, via l'extrémité en épingle à cheveux du premier brin d'ADNc.  [...] Normalement c'est le fragment de Klenow qu'on utilise généralement sous le terme ADN pol I, non L'ADN polymérase I est une enzyme qui d'une part polymérise l'ADN à partir d'une matrice mais qui d'autre part coupe l'ADN grâce à son activité exonucléasique 5'-3'.  [...]

[Biochimie] la réplication d'ADN

La synthèse du brin retardé se fait fragment par fragment comme présenté sur ce graphique. Comme tu le vois sur le graphique, étant donné que l'ADN se déplie au fur et à mesure de la réplication, il ne peut être répliqué en une fois sur ce brin là. Des fragments (appelés fragements d'Okazaki) sont synthétisés les uns à la suite des autres et assemblés entre eux au fur et à mesure.  [...] ..alors grace à ces dérniers on obtient des fragements d'ADN ce que l'on appelle fragment d'okazaki...qui sont reliées les unes aux autres par l'enzyme de ligase en donnant à la fin un brin retardé 3'_5'.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et fluorescence...

2) une enzyme taq polymérase (celle qui reconstruit le fragment d'adn à haute température permettant de garder les brin séparés).  [...] Pour l'electrophorèse. il faut une cuve, de quoi faire des gels d'agarose, un marqueur de migration (produit que l'on met et qui à des fragment dont la taille est connue...ca permet de savoir la taille des fragment amplifiés.  [...]