• Forum - Enzyme, Anticorps, Activité

[Biochimie] Pré-incubation ribonucléase

Il m'arrive d'en utiliser régulièrement, sans avoir besoin de cette pré-incubation. Je pense que l'enzyme que vous avez utilisée était couplée avec un anticorps ou un autre nanosupport qui bloque son activité. L'incubation à 85°C permet alors de libérer l'activité au moment où on en a besoin et non pas avant.  [...] oui c'est peut-être à cause d'un anticorps. On a utilisé cette enzyme lors d'un laboratoire sur l'extraction de l'ADN.  [...]

Marquage anticorps secondaire

j'ai pas compris la difference entre la methode directe et indirecte et surtout l'objectif de notre experience est d'identifier le complexe anticorps-antigéne par contre dans l'extrait que j'ai copié il nous parle sur le couple marqueur anticorps.. à quoi sert ce couple anticorps marqueur.  [...] Le principe à retenir est qu'on marque un anticorps avec une molécule détectable. un fluorophore, une enzyme possèdant une activité visible et/ou mesurable. Soit cet anticorps reconnait directement l'antigène, c'est la méthode directe, soit l'anticorps reconnait un autre anticorps qui quant à lui reconnait l'antigène, c'est la méthode indirecte.  [...]

[Immunologie] immunoblote

bonsoir, si c possible de m'expliquer le principe d'immunoblote je c que c une électrophorèse qui a un rapport avec un anticorps mais j'ai pas bien compris merci.  [...] Tu dépose l'échantillon protéique sur SDS-PAGE après migration tu fait agir l'anticorps dirigé spécifiquement contre la proteine que tu veux détecter. Cette anticorps est couplé à une enzyme ou un fluorochrome comme sa après lavage si tu detectes l'activité enzymatique ou la fluorescence sa veux dire que l'anticorps est présent est donc que le protéine est présente.  [...]

Immunoblot

C'est tout à fait ça. Et pour le western, on détecte les protéines avec un anticorps dirigé contre la protéine d'intérêt, cet anticorps lui-même porteur d'une activité détectable (fluorescence, activité enzymatique, radioactivité). C'est donc une variante du SDS-PAGE, car c'est toujours une électrophorèse de protéines sauf qu'on n'est pas en conditions dénaturantes et qu'on détecte avec un anticorps.  [...] Et pour le western, on détecte les protéines avec un anticorps dirigé contre la protéine d'intérêt, cet anticorps lui-même porteur d'une activité détectable (fluorescence, activité enzymatique, radioactivité).  [...]

anticorps neutralisants

Les anticorps normaux sont dirigés vers un antigène (présent sur un pathogène) pour induire son élimination alors que les anticorps neutralisants sont par exemple dirigés vers le site actif d'une enzyme et donc ne lui permet pas de fixer son ligand et de réaliser son activité catalytique (c'est un exemple on peut diriger contre d'autres protéines).  [...] Les anticorps neutralisants sont également dirigés contre un antigène. Dans le cas d'un anticorps dirigé contre une enzyme, cette dernière est bien un antigène. Effectivement l'anticorps empêche l'antigène contre lequel il est dirigé d'exercer sa fonction mais cela peut se traduire de différentes manières.  [...]

[Biochimie] abzyme

En présence d'un abzyme, cet anticorps aurait donc une structure analogue à cet état de transition et s'y lierait pour favoriser l'activité catalytique.  [...] (B) La molécule à gauche est liée de façon covalente à une protéine et utilisée en tant qu'antigène afin de créer un anticorps lequel se lie fortement à la région de la molécule en jaune. Comme cet anticorps est lié fortement durant l'étape de transition en (A), il a été montré qu'il avait un rôle d'enzyme catalysant de manière efficace l'hydrolyse d'une liaison peptidique dans la molécule de droite.  [...]

gène muté?

- la neutralisation de cette enzyme par les anticorps monoclonaux utilisés n'est pas.  [...] un anticorp mnoclonal ne reconnait qu'un seul epitope dans la proteine. Si par manque de chance cet epitope est muté alors l'enzyme ne sera plus reconnue par l'anticorps.  [...]

[Biochimie] Immunoblotting, anticorps

Ma question porte sur les anticorps qu'ils ont utilisés... Au lieu de prendre un anticorps contre tout l'enzyme (anticorps qui existe), ils ont préféré d'abord ajouter - par clonage - une séquence tag et ensuite utiliser un anticorps contre ce tag.  [...] ben oui, l'anticorps spécifique reconnaitrait les deux, alors que l'anti tag ne reconnait que la recombinante. Comme ca tu es sur que ta construction s'exprime, et tu peux en plus purifier ta protéine en utilisant ce tag (d'ailleurs c'est peut être ce qui a été fait non ).  [...]

[Biochimie] marquage à la digoxigenine

La digoxigénine est incorporée dans la séquence d'ADN au cours de la PCR, sous la forme de dUTP-digoxigénine le plus souvent. Et on utilise ensuite un anticorps qui reconnaît spécifiquement la digoxigénine. Je n'ai jamais entendu parler d'une enzyme spécifique de cette molécule perso.  [...] Merci Zellus de m'avoir corriger, je voulais dire un anticorps couplé à une enzyme et cette enzyme va engendrer une réaction colorée qui nous permettra de visualiser les échantillons positifs.  [...]

[Biologie Moléculaire] kinase

Si la protéine à la quelle je pense, est bien Y-phospho alors l'anticorps devrait se fixer dessus et bloquer ainsi son activité. L'inactivation de la proteine en question pouvant etre suivi par un test enzymatique, je devrais pouvoir quantifier précisément l'effet de l'anticorps.  [...] En general, quand il s'agit de toxine, d'inhibiteurs etc... on ajoute le solvant, mais dans ce cas, comme on ajoute une proteine qui a une activite non negligeable, l'anticorps, il est bien d'ajouter le meme type de proteine mais qui n'a pas la meme specificite pour etre sur qu'il n'y a pas une reaction aspecifique inattendue de la partie conserve de l'anticorps par exemple qui menerait a une conclusion attive et fausse.  [...]