• Forum - Efficacité, Transformation, Bactéries

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

Donc effectivement, on peut avoir culture sur le contrôle puisque le vecteur est résistant à l'ampicilline (j'ai tendance à pas mal m'embrouiller avec tout ça). D'après ce que tu dis pour le contrôle négatif, un vecteur qui n'a pas inséré d'insert ne va pas entrer dans les bactéries lors de la transformation bactérienne et du choc thermique Le vecteur ne peut pas entrer seul dans les bactéries.  [...] En ce qui concerne l'efficacité de ta transformation (vecteur+insert) elle n'est que de 13.10^3 bactéries transformées/µg d'ADN ce qui est faible (une valeur de 10^6 est en général souhaitable).  [...]

Transformation/inativation d'un gène

Moi je voudrais déléter un gène chez Neurospora Crassa, a savoir un champignon ( je sais que les levures possèdent des plasmides, ce qui rend une transformation classique, style transformation bactérienne possible).  [...] Une dernière petite question, est que l'efficacité de transformation va être la même que j'ai les bactéries ( ou est ce que le fait d'être chez des procaryotes va diminuer un peu l'efficacité ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme de ligase?

1/ Calcule to efficacité de transformation, si elle est en dessous de 10^6 colonies /ug de pUC18 (ou un plasmide de petite taille équivalent), jette tes bactéries et reprépares-en d'autres (ou achètes-en d'autres). Je vois trop d'étudiants me dire j'ai transformé 1ug de plasmide et j'ai un tapis, donc mes bactos sont OK.  [...] 2/ Je n'aime pas trop que les deux partenaires d'une ligation soient extraits d'un gel, ça diminue pas mal l'efficacité de ligation. Il vaut mieux purifier uniquement le fragment sur gel et traiter le vecteur à la phosphatase (+ extraction phénol après, of course).  [...]

[Biologie Moléculaire] Efficacité de transfection

Jusque là tout va bien. Mon problème c'est V. Il s'agit dixit du volume total. mais à quoi correspond-il Au volume total de réactif de transfection + plasmide ou bien plutot au volume total de chaque cupule.   [...] Donc ma question est la suivante. quelqu'un peut-il m'expliciter la formule d'efficacité de transfection qui pourtant devrait revenir au meme qu'une formule d'Efficacité de transformation mais comme on travaille directement sur culture de cellules au lieu de travailler sur gélose comme pour la transfo bactérienn, et bien c'est bête mais on s'y perd.  [...]

[Génétique] Help! tp génétique, analyse clonage

L'efficacité de transfo = nombre de bactéries avec plasmides /ug d'ADN.==. bacto sur milieu sélectif / quantité d'ADN utilisé pour la transfo. Tenir compte de la dilution éventuelle des bactos avant étalement.  [...] Questions. jJe crois que je faisais une erreur en associant la transformation des bactéries et leur compétences. Quest ce qu'une cellule compétente C'est une cellule transformée.  [...]

[Biochimie] La fermentation Lactique.

Or d'après mes recherches ces deux bactéries possédent une voie de Leloir déficiente du fait de la non transcription des gènes K,T et E des enzymes nécessaires à la transformation du galactose.De plus ce galactose sert dans un antiport Lactose/Galactose.Jusque là tout va bien.  [...] Cependant pourquoi les industriels utilisent ces bactéries au lieu d'autres bactéries.Autres bactéries qui permettrait la transformation du galactose également et donc une acidification plus rapide du mélange et donc une action plus rapide sur la caséine et ainsi une coagulation plus rapide.  [...]

transformation e.coli par le plasmide pglo

Tu fais ta transfo (tu la fait bien biensur sinon ça risque pas de marcher) puis tu incube overnight. Et le lendemain tu compte le nombre de colonie positives en fonction de ta selection puis tu calcul la quantité de plasmide que tu a utilisé pour la transfo.   [...] Là tu es donc à 0.05µg/µl (puisque j'ai considéré que tes 400µg d'eau stérile c'est enfaite 400µl d'eau stérile LOL) Et donc si ta fait la transfo classique 10µl plasmide + 40µl cellules alors ta étalé 0.5µg de plasmide. Donc si t'a compté 600 colonies admettons, alors l'efficacité c'est.  [...]

clonage qui ne fonctionne pas ? ratio ?

Ce n'est pas mon cas car mon controle de transformation est justement le plasmide contenant l'insert (fournit par le collaborareur qui est celui qui a été digéré et purifié sur gel) et les bacteries pousse.  [...] @flyingbike. mon expérience perso c'est que la ligation proprement dite est rarement le problème. Quasiment tous les problèmes de ligation que j'ai vu sont en fait des problèmes de restriction ou de transformation (bactéries pas suffisamment compétentes).  [...]

[Microbiologie] Transfert de gènes par conjugaison/transformation

L'ADN transformant et l'ADN de la bactérie réceptrice doivent être similaires et la transformation n'est possible qu'entre bactéries d'une même espèce ou qu'entre bactéries appartenant à des espèces voisines.  [...] Mais il n'y a pas de contact direct entre ces deux bactéries et le mécanisme de transformation en lui même correspond bien à ce que j'ai dit même si avant d'être dans le milieu extérieur, l'ADN appartenait à une autre bactérie.  [...]

Probleme d'induction de GST dans bacterie

Le protocole est assez classique. transformation de bactéries avec 5ng de plasmide par choc thermique et sélection sur pétrie avec d'ampicilline.  [...] Edit. bien sur il faut refaire une transformation, l'efficacité de la production diminuant en général avec le temps depuis la transfo. Je n'utilise jamais pour la production de transfo vieilles de plus de 3 jours.  [...]