• Forum - Efficacité, Bactéries, ADN

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

En ce qui concerne l'efficacité de ta transformation (vecteur+insert) elle n'est que de 13.10^3 bactéries transformées/µg d'ADN ce qui est faible (une valeur de 10^6 est en général souhaitable).  [...] Comme tu l'as dit. plasmide + ligase = voir les plasmides mal digérés, mal déphosphorylés. Si la ligase est mauvaise, un faible nombre de bactéries transformées sera peu représentatif de l'efficacité réelle de la digestion et surtout de la déphosphorylation. On peut alors partir sur une fausse piste.  [...]

[Génétique] Help! tp génétique, analyse clonage

Ces bactéries avec plasmides sont dites resistantes et vont pousser sur milieu sélectifs. ==. Les bactos transformés par rien ne poussent pas sur ce milieu = controle négatif.  [...] L'efficacité de transfo = nombre de bactéries avec plasmides /ug d'ADN.==. bacto sur milieu sélectif / quantité d'ADN utilisé pour la transfo. Tenir compte de la dilution éventuelle des bactos avant étalement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quantification absolue / gamme étalon

J'utilise la PCR quantitative, quantification absolue avec une gamme étalon obtenue par dilution de quantités connues d'ADN. Je cherche à déterminer les quantités d'ADN d'échantillons. Je travaille en SYBR Green. Mon efficacité de PCR et la spécificité de mes amorces sont OK.  [...] Il se peut en effet que mon efficacité de PCR soit différente pour la gamme étalon et pour l'échantillon.. L'ADN est extrait de bactéries et ces bactéries sont dans des matrices différentes pour la gamme étalon et pour l'échantillon.  [...]

[Biochimie] Mutagénèse dirigée

Pour l'instant comme je l'ai dit je vais vérifier l'efficacité de mes bactéries et l'état de mon ADN qui a été plusieurs fois congelé et décongelé... Peut-être est-il dégradé.  [...] Le problème est probablement résolu depuis belle lurette, mais si quelqu'un est dans le même cas de figure, j'apporte tout de même mon grain de sel. Je pense que le problème est bel et bien que la transformation n'est pas fait dans la bonne bactérie. En effet, les plasmides issus de cette mutagénèse ne sont pas fermés, ils doivent donc être transformés dans des XL1 qui a la capacité de lier les deux bouts du plasmide.  [...]

Antibiotique.

Si les bactéries sont capable d'évoluer et de devenir capable de contrer l'effet des antibiotiques, est ce que le phénomène est réversible, c'est à dire que les anti-biotiques eux aussi sont capable de développer leur efficacité pour neutraliser la résistance des bactéries.  [...] c'est à dire que les anti-biotiques eux aussi sont capable de développer leur efficacité pour neutraliser la résistance des bactéries.  [...]

[Biologie Moléculaire] Différences entre les types de Taq ?

- efficacité (à chaque cycle de PCR, ta quantité d'ADN est multipliée par 1+E ou en théorie E=1).  [...] L'efficacité va aussi dépendre de la qualité de l'ADN, du cycle utilisé, s'il est bien optimisé, des quantités d'ions mises, etc.  [...]

Transformation/inativation d'un gène

Une dernière petite question, est que l'efficacité de transformation va être la même que j'ai les bactéries ( ou est ce que le fait d'être chez des procaryotes va diminuer un peu l'efficacité ).  [...] Dans ce cas tu dois transfecter de l'ADN linéaire, tu fais ta construction et tu linéarises. Si tu as créé une cassette dans ton vecteur bactérien tu purifie après linéarisation. Si tu veux utilisé tout le plasmide en entier je passerai sur gel quand même pour être certain que tu as que de l'ADN linéaire.  [...]

[Génétique] Précipitation de l'ADN dans l'éthanol, pourquoi une T° basse?

Il a été montré qu'on pouvait précipiter l'ADN a temperature ambiante avec la meme efficacité qu'a -20°C. Cette croyance proviens du fait que l'ethanol deviens plus visqueux a basse temperature, mais ca n'a pas d'influence sur l'efficacité de précipitation.  [...] Tu aurais une référence sur ce que tu dit (pour pouvoir intégrer cette donéne dans une rédaction tout en jsutifiant la source).   [...]

toxicité des vaccins - Page 3

Quand au retour de bâton ça n'est pas, contrairement à ce que certains veulent faire croire, une agravation du problème, mais seulement une diminution d'efficacité de certains antibiotiques liés à l'évolution des bactéries. Cette évolution oblige à adapter les stratégies d'usage des antibiotiques afin de ne pas trop sélectionner des souches résistantes.  [...] Il est toutefois important de noter que les résistances des bactéries contre les antibiotiques ont généralement un coût pour les bactéries. en absence de traitement par un antibiotique donné, la résistance sera assez rapidement contre-sélectionnée (et on a donc à nouveau une bonne efficacité de l'antibiotique).  [...]

a l'aide : double hybride en levure!!!!

Alors l'efficacité de transfo est le nombre de colonie sur la boite obtenue avec 1 microgramme d'ADN. En général on se situe aux alentours de 10 4.  [...] l'efficacite de co-transfo. étaler une partie aliquote de ta co-transfo sur un milieu de culture sélectionnant les deux plasmides (normalement c'est du -Trp/-Leu). Ta partie aliquote de ta co-transfo sera bien évidemment diluée (1/100, 1/1000) avant d'être étalée. Ensuite, tu prends en compte ces paramètres.  [...]