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problème PCR nichée

avant de tester mes échantillons j'ai voulu vérifier la PCR et sa sensibilité j'ai donc testé un malade dont la concentration plasmatique d'ADN est connue (10 5 ) avec des dilutions successives jusqu'à 10 2. j'ai obtenu une très belle bande pour le tube 10 2 et une très faible pour le 10 4 et rien pour les 10 5 et 10 3.  [...] 2/ j'ai testé comme meme quelques échantillons une fois avec comme témoin positif ce témoin à 10 2 et la PCR avait très bien marchée. j'ai restesté une 2ème fois avec d'autre échantillons et la j'ai aucune bande dans le témoin positif alors que j'ai rien changé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Je viens de penser à autre chose aussi. Est-ce que tu as un témoin positif de ta PCR Ca te permettra de cibler où est ton problème dans le mix ou dans les échantillons.  [...] sinon nous avons essayer des témoins positifs. un plasmide comprenant la s quence que nous cherchons et sa fonctionne mais avec de l'ADNc qui fonctionner cette été sa ne fonctionne plus alors que les 2 sont faits en meme temps avec le meme mix.  [...]

[Immunologie] Contrôle positif et négatif

Le contrôle négatif sert aussi à démontrer que tes réactifs ne sont pas contaminés, et qu'un résultat positif est bien du à ton échantillon et non à un Ag déjà présent dans ta plaque.  [...] Le contrôle positif valide les résultats négatifs et ta manip en général. Si tu n'as pas de témoin positif et que tous tes échantillons sont négatifs, peux tu affirmer que tous n'ont pas l'Ag ou est ce que ça peut être du à un problème de manip.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème PCR : Besoin d'aide

quand j'utilise l'ARN synthétique que l'on ma fourni comme Témoin Positif, j'ai une bande, mais quand j'utilise mes échantillons de terrains, je n'ia pas de bande... mais je ne l'ai encore fait que sur un seul échantillon... je vais réessayer. merci beaucoup en tout cas.  [...] Je ne suis pas sûre que la remarque suivante sera très pertinente dans ton cas mais bon... Tu pars d'échantillons totaux si j'ai bien compris. Dans mon cas, je partais de sang total et je me suis rendue compte que les ARN eucaryotes gênaient pour la suite.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN

j'ai fait une extraction d'ARN au trizol qui a plutôt bien fonctionnée. J'ai fait un dosage afin de vérifier les concentrations et un gel afin de vérifier les contaminations. Tout était nikel. J'ai ensuite fait un traitement DNAse avec un kit turbo DNAse, fait mes dosages et de nouveau un gel qui paraissaient bons.   [...] Afin de vérifier la présence d'ADN, j'ai fait une PCR avec des primers beta-tubuline. Et là, j'ai eu d'une part des fragments de beta tubuline amplifié dans tous mes échantillons mais d'autre par des fragments bizarres un peu partout sauf dans mon témoin positif.  [...]

[Biologie Moléculaire] problèmes de PCR , à l' aide!!!

mon extraction a été faite avec instagene matrix, je ne sais pas si vous en avez entendu parler. mon PCR des fois cela marche et des fois non,je veux dire les échantillons, pourtant le témoin positif marche toujours donc je pense que le problème viendrait de mes extraits d'ADN et de leur pureté.  [...] non, il ne l'est pas. pour tout dire je fais une mise au point d'une technique d'extraction sans broyage chez les puces. en gros, on laisse incuber chaque spécimen dans Instagene matrix à 56°C toute une nuit, on fait un boiling pendant 8min. on centrifuge et on récupère le surnageant pour le PCR, le culot est constitué de billes de chelex qui capte les inhibiteurs selon le protocole du fabriquant.   [...]

[Biologie Moléculaire] augmentation du taux d'ARN mais non celui de la protéine

je m'attends donc à avoir une augmentation d'expression de ma protéine dans les échantillons traités et dans le témoin 20% SVF et rien dans témoin négatif.  [...] ce que je constate c'est une augmentation de ma protéine que dans le témoin positif et non dans les traités. sachant que l'induction de l'ARNm du 20% SVF est moins importante que dans les traitements.  [...]

[Biologie Moléculaire] probléme de migration d'ADN sur gel d'agarose

A son issue, on regarde les résultats sur gel d'agarose(+Bromure d'éthidium).Le témoin négatif(2microlitres d'eau à la place de l'ADN) est bien négatif, le témoin positif(ADN de feuille de tomate dont on est sur qu'il s'hybride) est bien positif.Le problème survient sur notre échantillon.  [...] Essaie aussi de diminuer la quantité d'ADN de ton échantillon Vous l'avez dosé pour vérifier que vous être dans le même ordre de grandeur que le témoin positif.  [...]

[Immunologie] Elisa & Ifi

La DO du témoin positif n'a pas besoin d'être maximale. Il faut juste qu'il y ait un changement de coloration qui prouve qu'il y a présence de l'Ac recherché.  [...] Ben par rapport au témoin négatif comme j'ai dit. Mais il faut aussi regarder la DO du blanc qu'il faut soustraire à toutes les autres DO (positif, négatif et échantillons testés).  [...]

[Microbiologie] Antibiogramme pour tester l'activité de nouvelles molécules.

Si aucune des dillutions préparées ne présente de croissance, vérifier le témoin positif. En cas de témoin valide, recomencer la gamme avec une dillution plus forte.  [...] À partir de l'innoculum, effectuer chacun des ensemencements. Par sécurité/praticité, d'abord le tube témoin positif, puis chaque dilution en commençant par la plus grande.  [...]