• Forum - échantillons, Marquage, Total

[Biologie Cellulaire] immunofluorescence

Là sur 40 échantillons. 20 contrôle et 20 malades (je parle notamment du cortex là) j'en ai 6 qui sont avec le marquage attendu et donc 34 avec le marquage perinucleaire. Mais, les échantillons qui ont le marquage périnucléaire ont des endroits dans le cortex où il y a le marquage entier.  [...] Alors qu'il y a des échantillons où je n'ai que du marquage total et pas que périnucléaire. Cependant, autour et dans l'hypothalamus je n'ai que du marquage attendu pour toutes les lames par exemple.  [...]

[Biologie Moléculaire] Erk Total

Lorsqu'on utilise un anticorps Erk Total (en western blot et autre), il s'agit de seulement Erk normal ou de Erk normal + Erk phosphorylé (de façon général lorsqu'on utilise un anticorps Total on voit quoi toutes les formes de la cible).  [...] En revanche, lors d'immunocytochimie avec Erk total en observant les cellules aux microscopes, on aura un marquage à la fois sur Erk et Erk-p c'est bien ça.  [...]

[Biochimie] Purification de protéine recombinante de faible PM

Oui je fais une chromato d'affinité pour la purif (colonne Ni-NTa). En fait, je suis en ce moment même en train de faire un western blot sur mes échantillons lysat bactérien... pour déterminer si ma prot est bien produite par mon systeme. Si c'est le cas alors mon probleme vien de ma façon de purifier.  [...] D'accord avec gorben, pour le coomassie. Sur mon Blot (résultat d'hier) je vois un marquage de mon surnageant de lysat avec un anti HIS, même si il est un peu faible. NB. j'ai fait un blot un peu spéciale pour gagner du temp. j'ai spotter directement 10 µL de mes échantillons (Surnageant, culot, éluat, ctrl positif.  [...]

Genes dans l'ADN

si c'est au sens découvrir. on travaille essentiellement sur l'étude de transmissions d'anomalies dans une famille (ou un population). En combinant les observations sur plusieurs gènes, on peut arriver à déterminer la localisation globale du gène (en gros, on applique des règles staistiques qui permettent de déterminer si ce gène est transmis par le même chromosome qu'un gène de référence qu'on connait).   [...] on peut aussi utiliser - lorsqu'on connait le gène à trouver - un court fragment de ce gène (repérable grace à un marqueur radioactif) que l'on fait incuber avec l'ADN total de l'individu chez qui on cherche le gène. ce fragment, appelé sonde, se fixera de façon spécifique au gène à repérer et le révèlera grace à son marquage radioactif.  [...]

Marquage Annexine V/ PI Cytométrie: concentration cellulaire

La concentration que te donne le kit est pour un marquage optimal, à priori 10^6 cellules totales/ml pour faire ton marquage dans 100µl, s'il y a trop de cellules le marquage peut perdre en efficacité.  [...] Donc il vaut mieux que je compte mes cellules dans chaque échantillon pour être sûre d'en avoir assez/pas trop pour chaque expérience.  [...]

[Biologie Cellulaire] Immunofluorescence marquage

Mais pour plus de précision, que désirez vous montrer dans votre marquage cellule totale en confocal Vous pourriez utiliser un marqueur du cytosquelette non.  [...] J'utilise déjà du vert pour un troisième marquage d'Ac membranaires qui est très bien actuellement et donc j'aimerais ne pas avoir à le changer.  [...]

mesure de l'expression d'un gene

Enfin pour le marquage métabolique, je ne supprime pas le biais de la stabilité de la proteine c'est vrai, mais je ne mesure plus que les proteine traduites pendant un temps donné et non pas la quantité totale dans la cellule. Si j'inactive le protéasome je peux optimiser ma mesure c'est cool ça.  [...] Je confirme que pour analyser rapidement la taux d'expression d'une protéine particulière, on utilise le western blot (WB). C'est une technique facile à mettre en oeuvre, éprouvée, qui permet de faire des comparaisons très rapidement (plusieurs échantillons en même temps) et relativement rapide.  [...]

Epifluorescence et bleeching d'origine inconnu

Après culture, je fixe mes échantillon en PFA3%, rinçage au PBS puis immunofluorescence (double marquage de mon pathogène ET d'endosomes).  [...] J'ai beau me poser toutes les questions possibles, je ne trouve pas d'explications. les cellules proviennent de la même souris, les anticorps primaires et secondaires sont issus du même aliquot, la longueur d'onde à laquelle j'observe mes échantillons est la même pour un échantillon bleechant et non bleechant.  [...]

[Microbiologie] Cytométrie en flux

peut être que tu n'as pas de moisissures dans l'échantillon ou peut être que la phase d'acquisition et d'analyse des résultats sur PC est mal faite, c'est un peu délicat, fais toi aider. c'est peut être que les mosissures sont en trés faible quantité et que t'as mal positionné ta fenêtre d'analyse.  [...] incuber un échantillon dans un bouillon de culture pendant quelques jours puis le passer au cytomètre après marquage avec des marqueurs spécifiques aux levures et moisissures.  [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 15

alors les machins verts ressemblent bien aux neurones en culture. Une protéine fusionnée GFP à adressage somato-dendritique dirais qui a l'air de s'accumuler edans la voir de sécrétion (ou d'y être associée). Le marquage n'est pas clairement synaptique mais ponculé. Je dirais bien NR2b (loterie).  [...] EN bleu ça ressemble à des noyaus avec le DAPI, le hic c'est que les noyaux des neurones ne sont pas marqués. marquage spécifique des noyaux des cellules gliales avec un nucléotide fluorescent spécifique des cellules en division.  [...]