• Forum - échantillons, Complexes, Protéine, Anticorps, ADN

[Biologie Moléculaire] Utilisation de la résine Chelex pour reverse crosslink de l'adn

Je l'utilise dans le cadre d'immunoprécipitation de la chromatine, j'en ajoute 100 uL à 10% sur mes échantillons immunoprécipités pour détacher les complexes protéine/anticorps/billes de l'adn. Pour cela je mets le tout à 99°C pendant 10 minutes.  [...] en tout cas le 4ème lien google est http.//bpi.sophia.inra.fr/docs/Extraction_chelex.pdf, certes cela me dit que les billes captent les impuretés protéiques, mais comment quel est le rapport avec le fait que le chelex soit une résine échangeuse d'ions est-ce que les protéines sont détachées par la température, puis captées par le chélex et la question au sujet des sels reste entière.  [...]

[Biochimie] sérum et anticorps polyclonaux

j'aimerais quantifier et vérifier la taille de ma protéine favorite dans un ensemble d'échantillons par western blot. Jusque là pas de problème. Malheureusement, aucun anticorps commercial n'existe contre cette protéine et aucun article ne rapporte la réalisation d'un tel anticorps.  [...] Cependant, une compagnie me propose de mettre à ma disposition un sérum dirigé contre cette protéine. Si je me souviens bien mes cours de fac, un serum est un ensemble non purifié de tous les anticorps produits par un animal immunisé ce qui, par définition, entraine une spécificité très relative.  [...]

Recherche de références d'un anticorps anti FAS HUMAIN

Recherche de références d'un anticorps anti FAS HUMAIN.  [...] Je dois faire un western blot de la protéine FAS à partir d'échantillons provenant des cellules HepG2. Quelqu'un aurait-il des références d'anticorps qui marchent bien.  [...]

[Biochimie] Medecine légale/Identification ADN

Le délai change-t-il selon le type d'identification. identification d'un individu à partir d'un échantillon d'ADN du même individu, identification à partir de l'ADN d'un parent, ou identification de l'ascendance maternelle à partir d'ADN mitochondriale.  [...] Enfin existe-t-il d'autres techniques génétique plus rapides que le séquençage (i.e.. numérisation 'échantillons l'ADN) permettant d'identifier un individu. utilisation de réactions d'anticorps spécifiques (je n'y connais rien...j'imagine) ou autres.  [...]

[Immunologie] Réarrangement des chaînes lourdes et légères

De l'ADN était isolé de trois sources. des cellules hépatiques, des cellules de lymphome pré-B et des cellules de myélome sécrétrices d'anticorps. Chaque échantillon d'ADN était digéré séparément avec les enzymes de restriction BamHI et EcoRI qui clivent l'ADN des chaînes lourdes et des chaînes légères º de la lignée germinale comme il est indiqué dans la partie (a) de la figure d'accompagnement. Les échantillons digérés étaient.  [...] radiomarquée avec les digestats d'EcoRI (blot #2). Les profils des blots sont décrits dans la partie (b) de la figure. En vous appuyant sur ces informations, quel échantillon d'ADN (appelé A, B ou C) était isolé (a) des cellules du foie, (b) des cellules de lymphome pré-B et (c) des plasmocytes sécréteurs d'IgM. Expliquez vos attributions.  [...]

Anticorps anti Lipocalin2

Je fais un western sur des echantillons de fois de souris. La Lipocalin2 est ma proteine d'interet. J'ai un anticorps de chez Thermo, mais il ne marche pas. Quelqu'un aurait-il des réferences d'un AC qui marcherait bien chez la souris.  [...] je ne connais pas la lipocalin2. mais je peux vous donner des références de boîtes qui font de très bons anticorps en général.  [...]

Traitements des données en QPCR

Je fais actuellement de la QPCR après une technique de ChIP (chromatin immunoprecipitation) et je me pose quelques questions sur le traitement de mes données. Je dois en effet comparer l'échantillon sans anticorps (ou normalement il ne doit pas y avoir d'ADN) avec l'échantillon d'ADN immunoprécipité.  [...] Dans une première manip, je vais faire deux courbes standart (une pour le gène de référence et une pour le gène d'intérêt) et je vais mettre tous mes échantillons (ADN immunoprécipité, plus le tube sans anticorps ) avec chacun des deux couples de primers.  [...]

[Biochimie] élution protéine

Pour savoir si tu as deux protéines différentes (troisièmepoint énoncé), tu prélèves un échantillon de chacune de tes fractions. Tu le dénatures puis tu le fait migrer sur un gel SDS-PAGE (donc condition dénaturante). Soit tu révèle en bleu de comassie, avec l'indication de taille tu pourras déjà suspecter d'avoir la même protéine ou non.  [...] Soit tu fais un western blot avec un anticorps dirigé contre ta protéine d'intérêt. Cela ne te permettra pas de tirer une conclusion définitive mais d'avoir une idée sur la nature des pics. Pour avoir une conclusion quasi-définitive, tu analyses tes échantillons par spectrométrie de masse (ESI-MS douce pour une indication de masse, MS-MS pour une définition de la séquence peptidique).  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot difficile d'une protéine de réparation de l'ADN

Suite à quelques problèmes (impossible de mettre en évidence ladite protéine), j'ai décidé d'inclure une étape de sonication pour découper l'ADN des échantillons cellulaires.  [...] 1/ Après récolte des échantillons cellulaires, effectuer 2 lavages des culots au PBS 1X contenant 1 mM de PMSF et 0,5 µg/mL des inhibiteurs de protéases suivants. aprotinine, antipain et leupeptine ( l e tout glacial ) entrecoupés de centrifugation 800 x g /2 minutes/4°C.  [...]

Conservation d'échantillons biologiques à t° ambiante

Au pire transporte tes échantillons dans un sachet étanche recouvert de glace, ce sera toujours mieux que la température ambiante. Comme l'a dit Gorben si c'estpour en extraire de l'ADN ca ne devrait pas poser de soucis, ca ne serait pas le même problème si tu voulais en extraire de l'ARN.  [...] Tout ca pour dire qu'il est plus simple de payer un peu plus cher et d'envoyer les echantillons proprements que de les perdre et de devoir les refaire les renvoyer une seconde fois. La solution la plus simple, la mieux et la moins chere etant de faire l'extraction d'ADN toi meme, et d'envoyer l'ADN par la poste.  [...]