• Forum - échantillons, ARN, Dosage

[Biologie Moléculaire] j'ai besoin d'aide concernant mes echantillons d'ARN

j'ai eu des echantillons d'ARN tres concentrés apres dosage par spectro,quand j'ai fait le calcule pour faire la reverse transcription,le volume que je dois prelever est tro petit à prelever(=de 0.44µl)alors que ma pipette mesure à partir de 0.5µl,je ne sais pas quoi faire.  [...] tu dilues 2x ton échantillon, et tu prélèves 0.88ul de cette dilution au lieu de 0.44ul de la solution concentrée. Sinon c'est encore plus simple de diluer 10X et de prélever 4.4ul (plus les volumes sont importants, plus les erreurs sont proportionnellement faibles).  [...]

[Biologie Moléculaire] Dosage des ARN à l'orcinol

Or, j'ai lu sur des sites anglais que la réaction de Bial en milieu acide ne libérait que les pentoses liés aux purines, pas aux pyrimidines, et que donc il fallait - en supposant un ratio pyrimidine/purine de 1 dans l'ARN - multiplier par 2 les résultats obtenus avec ce dosage pour obtenir la concentration réelle.  [...] Pourquoi le ration purine/pyrimidine serait il de 1 dans les ARN Ceci ne vaut que pour l'ADN double brin. Il faudrait retrouver le tableau avec les %CG en fonction des organismes (je l'ai pas retrouvé en cherchouillant vite fait sur le net). Maintenant il faut aussi tenir compte du fait que le dosage spectro n'est pas une méthode de dosage absolument précise avec les appareils classiques.  [...]

Problème avec mes dosages d'ARN

Le rapport 260/280 doit etre fait avec un echantillon dilué dans du TE, le dosage 260 doit etre fait dans de l'eau... peut etre que ton probleme vient de la.  [...] En fait, je passe une fois mon échantillon dilué dans de l'eau au spectro et ça me donne les DO à 260 et 280 ainsi que le rapport pour l'avoir dans les mêmes conditions que le dosage des ARN proprement dit.  [...]

[Biologie Moléculaire] pb dosage ARNtotal spectro

J'ai fait ensuite un gel pour vérifier l'absence d'ARN suggérée par les dosages au spectro. Et pourtant, j'ai bien de l'ARN dans mes échantillons...Il faut cependant que je puisse doser mes ARN car après je fais un traitement DNase (but = qPCR, et mes amorces se fixent aussi bien sur l'ADN que sur l'ARN.  [...] Pour info, réalisant souvent un dosage au nanodrop vs ribogreen, il n'y a pas tant de différence ou de variation sur les titres obtenus, sauf dans le cas d'un échantillons très faiblement concentré pour lequel les contaminations (sels pour les colonnes, phénol pour le trizol) viennent interférer avec le spectre des ARNs.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gamme et témoin BSA

Afin d'étudier l'activité d'une enzyme, nous commençons par le dosage des protéines présentent dans nos échantillons (je m'explique, notre enzyme est extrait de venin de guêpes, afin de pouvoir avoir la même quantité de protéines dans chacun de nos échantillons on réalise un dosage).  [...] Nous utilisons une gamme étalon de BSA, jusque la aucuns problèmes. Ensuite lors de la mesure de l'activité enzymatique, plusieurs témoins sont utilisés et notamment le témoin où l'on remplace notre enzyme par de la BSA.   [...]

Extraction ARN totaux

Pour extraire les ARN totaux d'une culture cellulaire ou bien de tissu j'utilise la méthode classique phénol-guanidine isothiocyanate-chloroforme. J'obtiens des ARN de bonne qualité or lors du dosage spectrophotométrique j'ai une absorption assez importante à 230nm qui est légèrement inférieur voire identique à l'absorbance à 260nm.  [...] Personellement, j'utilise les kit QIAGEN pour effectuer mes extractions. Cette méthode consiste à capturer les ARN totaux sur une colonne et de la nettoyer par la suite. La dernière étape consiste à récupérer les ARN dans de l'eau RNase free. Tu peux effectuer ton dosage par la suite sans soucis.  [...]

[Biologie Cellulaire] Zymographie en Gélatine

SVP j'ai besoin du protocole de Zymographie pour le dosage de l'activité des métalloproteinases à partir de 2 echantillons.  [...] quels sont les étapes à suivre pour chaque type d'echantillon, et quelles sont les conditions de conservation et le milieu de transport des 2 echantillons.  [...]

[Biochimie] Dosages et composition cellulaire

J'ai fait un TP en métabolisme, dont le but général est d'isoler des organites cellulaires (entre autre mitochondrie et lysosome) et d'effectuer sur des fractions obtenues de reins et foie de moutons des réaction enzymatiques spécifiques et des dosages de manières à identifier ces organites.  [...] Tout d'abord, j'ai donc effectué un dosage d'ARN dans 15 tubes différents (les 7 premiers contenants une concentration connue et les7 autres contenant de l'arn que j'ai récupéré sur mes foies et reins) et j'ai tracé la courbe Absorbance =f([Concentration]).  [...]

[Biochimie] Analyse de l'expression du gène fos

Pour ce qui est de la détermination des tailles des bandes il vous faut procéder à partir des bandes présentes dans le marqueur de poids moléculaire que vous avez déposé dans la première et la dernière colonne (les échelles). Normalement on a du vous donner les tailles de chacune des bande qui le compose. Deux manières de procéder.   [...] Il y a sans doute une erreur qui vous échappe dans l'annotation de puits et les sondes utilisés (ou même une erreur de manipulation et/ou mélange ou inversement des échantillons par exemple..).  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN insoluble ??

les ARN de cellules non transfectées se resuspendent bien. Le problème c'est que pour transformer des hépatocytes, c'est la seule solution. Mais le PEI a été évacué en changeant le milieu, et il y a eu un lavage avant extraction.  [...] absolument. Je n'arrive pas a concevoir qu'un élément présent lors de la transfection, meme apres changement du milieu et lavage, persiste au point d'empecher les ARN de se remettre en solution.  [...]