• Forum - échantillons, ARN, ADN

[Biochimie] spectre d'absorption et ADN

soit un ADN naturel mitochondriale de lapin [0.4M], bicaténaire, hélicoïdale, circulaire, comportant 500pb et un ARN naturel d'E.Coli [0.4M] monocaténaire, pseudo-hélicoïdale à 30% comportant 250b.  [...] En fait comme tu as la même concentration dans les 2 échantillons, il y a autant de molécules. Cependant l'ARN comporte deux fois moins de paires de bases que l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] pb migration ADNg sur gel

Sur le 2ème gel, (extraction sur d'autres échantillons avec le même kit), la patate est plutot décalée vers le bas. Il est possible que lors d'une resuspension j'ai cassé mon ADN.  [...] La dans tes echantillons tu as doses ton ARN+ADN. Comme tu ne prend aucune precaution particuliere pour isoler l'ADN, ton ARN est +/- degrade.  [...]

Indicateur biologique du cuivre?

Il faut un minimum de cuivre (ou d'ion métallique divalent) pour faire fonctionner la plupart des enzymes (bactérienne ou humaine). D'ailleurs, l'EDTA, qui chélate (capture) ces ions, permet de conserver des échantillons de protéines/ADN/ARN de la dégradation enzymatique (en partie du moins).  [...] je ne pense pas qu'à des concentrations naturelles (moins de 1mg/L d'eau), le cuivre ai un effet sur les êtres vivants. Mais il y a peut-être une exception... (comme toujours ).   [...]

[Microbiologie] Viabilité d'une bactérie et ARN

Ton meilleur controle est définitivement un control dans lequel tu traites ton echantillons a la RNAse...car si dans ce cas le signal disparait alors c'est que ton produit d'ampli venait des ARN, en revanche si il y a quelquechose, c'est que tu as toujours de l'ADN contaminant.  [...] Ce que tu proposes (enlever l'enzyme RT), ne resoud pas le problème si ta Taq-polymerase possede une activité reverse transcriptase, dans tes témoins tu auras toujours une ampli...tu en conclueras que ton echantillon est contaminé par de l'ADN, alors qu'en réalité il n'en n'est rien.  [...]

[Biologie Moléculaire] les ARNs et extraction

Les échantillons sont déposés 2 fois mais à des quantité différente (les puits d'en haut contiennent moins de quantité d'ARN que les puits d'en bas). Je ne vois qu' un smear et dans tous les autres cas on ne distingue rien. Ceci est lié à une dégradation de l'ARN Peut-on dire qu'il y a contamination avec de l'ADN ou des protéines comment expliquer que dans un cas il y a un smear et que lorsque que l'on en dépose plus il n'y a rien merci de vos réponses.  [...] En fait dans les premiers puits en haut on a mis 1ug d'ARN après dilution (on le calcule a partir de la DO) et dans les puits d'en bas sont les mêmes échantillons avec 1µL de solution d'ARN (ça doit faire à peu près 10 µg). Il y a plusieurs puits car plusieurs dépôts on été fait à partir de plusieurs extraction (test de la répétabilité de la méthode).  [...]

[Biologie Moléculaire] pb dosage ARNtotal spectro

J'ai fait ensuite un gel pour vérifier l'absence d'ARN suggérée par les dosages au spectro. Et pourtant, j'ai bien de l'ARN dans mes échantillons...Il faut cependant que je puisse doser mes ARN car après je fais un traitement DNase (but = qPCR, et mes amorces se fixent aussi bien sur l'ADN que sur l'ARN.  [...] Pour info, réalisant souvent un dosage au nanodrop vs ribogreen, il n'y a pas tant de différence ou de variation sur les titres obtenus, sauf dans le cas d'un échantillons très faiblement concentré pour lequel les contaminations (sels pour les colonnes, phénol pour le trizol) viennent interférer avec le spectre des ARNs.  [...]

qPCR résultats hors gamme standard!!!

De plus, 1 µL d'échantillon (ARN ou ADNc ) représente le contenu de combien de cellules Ton résultat peut indiquer que 1 cellule sur 10, sur 100 ou sur 1000 exprime le gène dans ton tissu (tu travailles avec des RT ).  [...] Pour les macrophages je peux savoir à peu près le nb de cellules que j'extrais mais c'est beaucoup plus dur pour le sang (globules rouges plus globules blancs). je traite mes extraits d'ARN avec de la DNAse alors j'espère qu'il n'y a pas d'ADN génomique dans mes échantillons.  [...]

Fabrication d'une puce à ADN

Ensuite à partir des ARN exprimés dans un échantillons biologique on réalise à partir de ce pool des ADNc qui nous serviront de sonde.  [...] Ensuite on hybride ces sondes avec le support solide et on detecte les spots allumés ( gènes qui se sont exprimés ) leur intensité dépends de la quantité d'ARNm présent dans l'échantillon.  [...]

Conservation d'échantillons biologiques à t° ambiante

A votre avis, combien de temps je peux conserver des échantillons biologiques, à température ambiante, en vue d'une extraction d'ADN.  [...] L'ADN étant très résistant, je (et d'autres personnes de mon labo) suppose que oui mais je préférerais avoir confirmation pour ne pas perdre mes échantillons (et donc du temps).  [...]

[Biologie Moléculaire] j'ai besoin d'aide concernant mes echantillons d'ARN

j'ai eu des echantillons d'ARN tres concentrés apres dosage par spectro,quand j'ai fait le calcule pour faire la reverse transcription,le volume que je dois prelever est tro petit à prelever(=de 0.44µl)alors que ma pipette mesure à partir de 0.5µl,je ne sais pas quoi faire.  [...] tu dilues 2x ton échantillon, et tu prélèves 0.88ul de cette dilution au lieu de 0.44ul de la solution concentrée. Sinon c'est encore plus simple de diluer 10X et de prélever 4.4ul (plus les volumes sont importants, plus les erreurs sont proportionnellement faibles).  [...]